[发明专利]一种花药特异表达启动子及其应用

权利要求书

1.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸：

(a)位于osigcfa001g12基因的5’端及其上游；

(b)碱基长度为200-2000个；

(c)具有引发转录的必要位点及转录起始点；且

(d)具有在植物花药中特异表达功能。

2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸是：

(1)SEQ ID NO：1中第1-521位所示的核苷酸序列的多核苷酸；

(2)SEQ ID NO：1中第1-552位所示的核苷酸序列的多核苷酸；

(3)(1)或(2)任一限定的多核苷酸，其中第1-22位碱基缺失；

(4)由SEQ ID NO：1中(1-22)～(521-552)位所示的核苷酸序列构成的多核苷酸；

(5)核苷酸序列在严格条件下能够与(1)-(4)任一限定的多核苷酸序列杂交且具有指导目的基因在植物花药中特异表达功能的多核苷酸；

(6)核苷酸序列与(1)-(4)任一限定的多核苷酸序列有80％以上同源性且具有指导目的基因在植物花药中特异表达功能的多核苷酸；或

(7)核苷酸序列与(1)-(4)任一限定的多核苷酸序列完全互补的多核苷酸。

3.如权利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸是：

基于SEQ ID NO：1中第1-521位或SEQ ID NO：1中第1-552位所示核苷酸序列，第436-442位、第146-153位、第278-283、第305-311位和/或第287-312位核苷酸序列不变，其它位点与(1)-(4)任一限定的多核苷酸序列具有50％以上相同性的，且具有指导目的基因在植物花药中特异表达功能的多核苷酸。

4.如权利要求2或3所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸是：基于SEQ ID NO：1中第1-521位或SEQ ID NO：1中第1-552位所示核苷酸序列，第99-104位、第115-120位和/或第131-138位核苷酸序列不变，其它位点与(1)-(4)任一限定的多核苷酸序列具有50％以上相同性的，且具有指导目的基因在植物花药中特异表达功能的多核苷酸。

5.权利要求1-4任一所述的多核苷酸的用途，用于指导目的基因在植物花药中特异表达。

6.一种载体，其特征在于，所述的载体含有权利要求1-4任一所述的多核苷酸，作为启动子元件。

7.如权利要求6所述的载体，其特征在于，所述的载体还含有与所述的多核苷酸操作性连接的目的基因。

8.如权利要求6所述的载体，其特征在于，所述的目的基因位于所述多核苷酸的下游，且与所述多核苷酸的间隔小于1000bp。

9.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述的细胞：

含有权利要求5所述的载体；或

其基因组中整合有外源的权利要求1-4任一所述的多核苷酸。

10.一种使目的基因在植物花药中特异表达的方法，其特征在于，所述的方法包括：

将构建物转化植物细胞，所述的构建物含有权利要求1-4任一所述的多核苷酸以及与所述的多核苷酸操作性连接的目的基因；

筛选出转入了所述构建物或染色体中整合有所述构建物的植物细胞；和

将所述植物细胞再生成植株。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的方法包括：

(a)提供携带表达载体的农杆菌，所述表达载体中含有构建物，所述的构建物含有权利要求1-4任一所述的多核苷酸以及与所述的多核苷酸操作性连接的目的基因；

(b)将植物细胞、组织或器官与步骤(a)中的农杆菌接触，从而使所述的构建物转入植物细胞。