[发明专利]灭活人尿中提取的胰蛋白酶抑制剂所含病毒的方法

权利要求书

1.一种灭活人尿中提取的胰蛋白酶抑制剂所含病毒的方法，其主要步骤如下：

将从人尿中提取的人尿胰蛋白酶抑制剂粗品溶解于pH5.0缓冲液，并于60℃加热10小时，然后吸附于DEAE层析柱，之后使用pH4.0含NaCl浓度为0.3M的0.1M醋酸缓冲液洗脱，得DEAE洗脱液；接着将所述DEAE洗脱液于1.5M-2.5M硫酸铵溶液上样，并吸附于疏水层析柱，之后使用1M硫酸铵溶液洗脱，得疏水洗脱液；所述疏水洗脱液经超滤后，于25℃，低pH孵化5小时后，再经凝胶过滤层析得病毒灭活的人尿胰蛋白酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述的灭活人尿中提取的胰蛋白酶抑制剂所含病毒的方法，其特征在于吸附于DEAE层析柱所用的缓冲液为pH4.0含NaCl浓度为0.1M的0.1M醋酸缓冲液。

3.根据权利要求1所述的灭活人尿中提取的胰蛋白酶抑制剂所含病毒的方法，其特征在于所述低pH孵化采用pH为1.5-4.5。

4.根据权利要求1所述的灭活人尿中提取的胰蛋白酶抑制剂所含病毒的方法，其特征在于所述超滤所用的超滤膜分子量为10K。

5.一种灭活人尿中提取的胰蛋白酶抑制剂所含病毒的方法，其主要步骤如下：

将从人尿中提取的人尿胰蛋白酶抑制剂粗品溶解于pH5.0缓冲液，制成浓度为，并于60℃加热10小时，然后将所述溶液于pH4.0含NaCl浓度为0.1M的0.1M醋酸缓冲液中上样，并吸附于DEAE层析柱，之后使用pH4.0含NaCl浓度为0.3M的0.1M醋酸缓冲液洗脱，得DEAE洗脱液；接着将所述DEAE洗脱液于1.5M-2.5M硫酸铵溶液上样，并吸附于疏水层析柱，之后使用1M硫酸铵溶液洗脱，得疏水洗脱液；所述疏水洗脱液经超滤10K后，于25℃，pH2.5-3.5条件5小时后，再经凝胶过滤层析得病毒灭活的人尿胰蛋白酶抑制剂。

6.根据权利要求1或5所述的灭活人尿中提取的胰蛋白酶抑制剂所含病毒的方法，其特征在于所述人尿胰蛋白酶抑制剂粗品的配置浓度为50mg/ml-100mg/ml的溶液。

7.一种灭活人尿中提取的胰蛋白酶抑制剂所含病毒的方法，其主要步骤如下：

1)将新鲜收集的尿液倾入搅拌池中，边搅拌，边将pH调至8.5-9.0，静置后取上清尿液；

2)调节所述上清尿液pH至4.5-6.5后，按每吨所述上清尿液加入25kg脱乙酰壳多糖，边加边搅拌，静置后取沉淀，并滤干得吸附物。

3)所得吸附物加入3倍重量的水漂洗并滤干，重复2次以上；

4)每千克所述吸附物加入1.0-2.0升pH为10.5-12.0的3N氨水溶液，洗脱所述吸附物，并收集氨水洗脱液；

5)根据按每升所述氨水洗脱液加入400g-450g固体硫酸铵，至全部溶解，静置过夜；

6)以硅藻土作底，抽滤，即得抽滤物；

7)每公斤所述抽滤物加入10升水溶解，将pH调至5.5-6.5后，离心，取上清液；

8)所述上清液用10K超滤膜，得超滤浓缩液；

9)每升所述超滤浓缩液加入1倍体积无水乙醇沉淀，并静置过夜；之后取下层混悬液离心，得清液，再加入和所述清液相同体积的无水乙醇沉淀，并静置过夜；再取下层混悬液离心，将沉淀物干燥，即得人尿胰蛋白酶抑制剂粗品；

10)将从人尿中提取的所述人尿胰蛋白酶抑制剂粗品溶解于pH5.0缓冲液，制成浓度为50mg/ml-100mg/ml的溶液，并于60℃加热10小时，然后将所述溶液于pH4.0含NaCl浓度为0.1M的0.1M醋酸缓冲液中上样，并吸附于DEAE层析柱，之后使用pH4.0含NaCl浓度为0.3M的0.1M醋酸缓冲液洗脱，得DEAE洗脱液；接着将所述DEAE洗脱液于1.5M-2.5M硫酸铵溶液上样，并吸附于疏水层析柱，之后使用1M硫酸铵溶液洗脱，得疏水洗脱液；所述疏水洗脱液经10K膜超滤后，于25℃，pH2.5-3.5条件5小时后，再经凝胶过滤层析得病毒灭活的人尿胰蛋白酶抑制剂。

8.根据权利要求1、5和7之一所述的灭活人尿中提取的胰蛋白酶抑制剂所含病毒的方法，其特征在于所述病毒为人免疫缺陷病毒、脑心肌炎病毒、伪狂犬病毒、水疱性口炎病毒和肝炎病毒之一种或几种。