[发明专利]一种清除藻毒素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种清除藻毒素的方法，属于环境生物技术领域。

背景技术

微囊藻毒素是由富营养化水体中的铜绿微囊藻、水华鱼腥藻、念珠藻等蓝藻产生的一种环状七肽物质。微囊藻毒素以动物肝脏为作用靶器官，能够特异性地抑制蛋白磷酸酶活性从而诱发癌症等一系列病变。在研究了藻毒素对居住于有毒蓝藻水华频繁爆发的太湖周边城市居民肝功能的影响后，发现长期饮用受藻毒素污染的水对人群肝功能有影响，肝脏酶学指标活性与饮水藻毒素暴露等级之间呈线性趋势。饮用水中痕量藻毒素的存在促进人类肿瘤形成的现象也不容忽视，流行病学调查表明，饮用水中微量藻毒素的存在与人群中原发性肝癌、大肠癌的发病率有很大的相关性，严重地威胁着人类的健康。江苏海门、启东和广西扶绥地区的原发肝癌发病率高与当地居民长期饮用含微量藻毒素的浅塘水和河流水有关，而当地饮用深井水的居民原发肝癌发病率则相当低。

目前微囊藻毒素的清除方法主要有化学氧化清除、物理吸附法以及生物法，生物法清除藻毒素利用的微生物主要集中于鞘氨醇单胞菌、铜绿假单胞菌以及食酸戴尔福特菌。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种清除一种清除藻毒素的方法，是在富含藻毒素的水体中投入乳酸乳球菌。

乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)ATCC 11454购自ATCC。

乳酸乳球菌的培养方法为：

培养基组成为：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K₂HPO₄2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温801mL，MgSO₄.7H₂O 0.58g，MnSO₄4H₂O 0.25g，蒸馏水1000mL；

从生长良好的平板上取2-3环乳酸乳球菌移入盛有0.5mL无菌甘油的小离心管中，盖上盖后用封口膜密封管口，放-20℃冰箱保存，将甘油管保藏的菌株接入液体培养基，在37℃静置培养20h至对数中后期。

所述方法中，菌泥的精制方法如下：取对数生长期中后期的益生菌发酵液，4℃、3200rpm离心10min收集菌泥，菌泥经过pH 7.0的磷酸盐缓冲液洗涤离心2次，收集菌体。

所述方法中，微囊藻毒素的检测采用高效液相的方法：

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×150mm，5.0μm)

流动相：乙腈∶H₂O(0.05％TFA)＝40∶60(v/v)

进样量：20μl；流速：1mL/min；柱温：40℃

检测器：DAD 238nm；MC-LR保留时间：3.48min

本发明采用乳酸乳球菌有效地清除水体中残留的藻毒素，首次提出采用乳酸乳球菌清除水体中残留的藻毒素，拓展了乳酸乳球菌的应用领域，提高了乳酸乳球菌的应用价值，为清除藻毒素提供了新思路。

具体实施方式

实施例1

培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K₂HPO₄2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温801mL，MgSO₄.7H₂O 0.58g，MnSO₄.4H₂O 0.25g，蒸馏水1000mL。

从生长良好的平板上取2-3环乳酸乳球菌移入盛有0.5mL无菌甘油的小离心管中，盖上盖后用封口膜密封管口，放-20℃冰箱保存，将甘油管保藏的菌株接入液体培养基，在37℃静置培养20h至对数中后期。

取对数生长期中后期的乳酸乳球菌发酵液，4℃、3200rpm离心10min收集菌泥，菌泥经过磷酸盐缓冲液(pH 7.0)洗涤离心2次，得到乳酸乳球菌菌泥。

乳酸乳球菌的计数采用活菌计数法，将菌悬液稀释一定倍数，在平板上涂布，计算菌落数。

将10¹⁰CFU/mL的乳酸乳球菌投入含有100μg/L的藻毒素的水中，乳酸乳球菌经24h后藻毒素含量为40μg/L。

实施例2