[发明专利]一种用于生产新型微生物源杀菌剂的生物工程菌株及其应用

权利要求书

1.一种用于生产微生物源杀菌剂的生物工程菌株，为将phzH基因重组表达质粒转化入产吩嗪-1-羧酸的菌株后获得，所述生物工程菌株产吩嗪-1-羧酸酰胺。

2.如权利要求1所述的生物工程菌株，其特征在于，所述phzH基因重组表达质粒能在产吩嗪-1-羧酸的菌株中表达phzH基因，编码产生PhzH(谷酰胺吩嗪-1-羧酸酰胺转移酶)。

3.如权利要求2所述的生物工程菌株，其特征在于，所述PhzH的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。

4.如权利要求2所述的生物工程菌株，其特征在于，所述phzH基因重组表达质粒为克隆有phzH基因片段的重组表达质粒。

5.如权利要求4所述的生物工程菌株，其特征在于，所述的phzH基因片段包含phzH基因的完整编码区及其5’端的非编码区。

6.如权利要求5所述的生物工程菌株，其特征在于，所述PhzH为假单胞菌的PhzH，且所述phzH基因片段为假单胞菌的phzH基因片段。

7.如权利要求6所述的生物工程菌株，其特征在于，所述假单胞菌为铜绿假单胞菌或绿针假单胞菌。

8.如权利要求7所述的生物工程菌株，其特征在于，所述假单胞菌选自铜绿假单胞菌株PAO1、LESB58、PA14、PUPa3或绿针假单胞菌株PCL1391。

9.如权利要求4所述的生物工程菌株，其特征在于，所述phzH基因片段的碱基序列为SEQID NO：2。

10.如权利要求1-9任一权利要求所述的生物工程菌株，其特征在于，用于构建所述phzH基因重组表达质粒的表达载体为大肠杆菌/假单胞菌穿梭表达质粒。

11.如权利要求10所述的生物工程菌株，其特征在于，所述大肠杆菌/假单胞菌穿梭表达质粒含有强启动子，且所述phzH基因片段克隆于所述强启动子之后，由该强启动子控制其表达。

12.如权利要求11所述的生物工程菌株，其特征在于，所述大肠杆菌/假单胞菌穿梭表达质粒为pBBR1MCS系列质粒及其衍生的表达质粒。

13.如权利要求12所述的生物工程菌株，其特征在于，所述大肠杆菌/假单胞菌穿梭表达质粒为pBBR1MCS-5，所述phzH基因在保证读码框正确的前提下，置于pBBR1MCS-5的噬菌体启动子T3prom控制下。

14.如权利要求1-13任一权利要求所述的生物工程菌株，其特征在于，所述产吩嗪-1-羧酸的菌株为促生拈抗菌M18或其衍生的工程菌株M18G。

15.如权利要求1-14任一权利要求所述的生物工程菌株用于发酵生产微生物源杀菌剂的用途。

16.一种微生物源杀菌剂，为权利要求1-14任一权利要求所述生物工程菌株的发酵液。

17.如权利要求16所述微生物源杀菌剂，其特征在于，所述发酵液的主要杀菌活性成分含吩嗪-1-羧酸酰胺。

18.如权利要求17所述微生物源杀菌剂，其特征在于，所述发酵液中，吩嗪-1-羧酸酰胺的含量为每升2500～2800毫克。

19.如权利要求16所述微生物源杀菌剂，其特征在于，所述微生物源杀菌剂为在合适表达吩嗪-1-羧酸及PhzH的条件下，发酵培养权利要求1-13任一权利要求所述的生物工程菌株后获得。

20.如权利要求19所述微生物源杀菌剂，其特征在于，所述微生物源杀菌剂采用包括下列步骤的方法获得：

1)生物工程菌株的活化；

2)种子扩大培养：先在甘油培养液中摇瓶培养后，转接入产素培养液中放大发酵培养获得发酵液。

21.如权利要求20所述微生物源杀菌剂，其特征在于，所述工程菌株活化采用固体甘油培养基活化培养。