[发明专利]一种心肌细胞的中药保存液及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种心肌细胞保存液及其应用。

背景技术

心肌梗死后，心肌细胞永久性丢失。且成熟心肌不可再生，不可能通过分裂增殖来弥补病理性细胞数量减少。虽然近来有研究证实在心肌梗死后梗死区边缘有少量心肌细胞发生有丝分裂，但这种分裂十分微弱，根本不足以代偿有临床意义的坏死心肌。现有治疗手段也无法促使心肌再生。近年来有研究使用细胞移植至受损心脏替代坏死心肌，修复心肌结构和功能，该技术称之为“心肌再生”或“细胞心肌成形术”(cellular cardiomyoplasty，CCM)。

心肌重塑是梗死后心功能持续恶化的核心机制，很多实验发现干细胞移植能阻止心肌重塑。Mangi等移植携带Akt基因的大鼠MSCs，发现心肌重塑被抑制、心功能改善，移植细胞占据80％～90％的瘢痕，有完全正常的收缩和舒张功能。他们认为心功能改善机制是CCM可以抑制心肌内炎症和病理性肥厚、减少胶原沉积。Kudo等。。发现骨髓干细胞移植的获益机制主要是减少心肌梗死面积和抑制纤维化。Chachques等.结扎羊两支冠脉，将骨骼肌卫星细胞(skeletal myoblasts，SMs)和VEGF注射至梗死中心和周边，3个月后细胞移植抑制了左室扩大。Olivares等发现MSCs移植后梗死心脏的心室几何形状得以很好的保持。

川芎嗪(Ligustrazine)来源于伞形科植物川芎的干燥根茎，为吡嗪类生物碱。川芎辛香行散，温通血脉，上行头颠，下走血海，功能活血行气，祛风止痛，被前人誉为血中之气药。现代研究表明川芎嗪有解痉、降低血管阻力和强烈抑制血小板聚集的作用，对已聚集的血小板有解聚作用，能明显降低全血粘度；还能增加冠脉流量、有改善心肌供氧、降低心肌耗氧的作用，治疗缺血性脑血管及冠心病效果良好，还可以治疗偏头痛和重症肺心病。川芎嗪的分子量为136.20，分子式：C₈H₁₂N₂，

金氏等发现东川芎能使SOD活性和MDA含量明显恢复，证实了东川芎能够稳定细胞的膜性结构，抵抗细胞膜和膜性结构受自由基攻击，最终达到清除自由基的目的，对缺氧缺糖心肌起保护作用。梁氏等在实验发现川芎嗪预处理对整体动物缺血再灌注损伤的保护作用后，用体外培养乳鼠心肌细胞观察了川芎嗪预处理对低氧/再给氧损伤的保护作用。结果表明川芎嗪预处理对体外培养乳鼠心肌细胞低氧/再给氧所致损伤具有保护作用，其机制可能与提高心肌细胞抗氧化酶活性，清除氧自由基有关。

目前大多动物实验和医学研究均取得积极结果，很多实验就细胞移植途径作出有意义的探索，但符合应用要求、安全高效的给入途径研究甚少。

发明内容

本发明的目的是提供一种心肌细胞保存液及其应用。

本发明提供的心肌细胞保存液，含有川芎嗪、N2添加剂、B27添加剂。所述川芎嗪浓度为10^-6mol/L-10^-8mol/L；所述N2添加剂百分浓度为1％(质量百分含量)；所述B27添加剂百分浓度为1％(质量百分含量)。

本发明提供的心肌细胞保存液，是优选为是将10^-6mol/L-10^-8mol/L川芎嗪、1％的N2添加剂(质量百分含量)、1％的B27添加剂(质量百分含量)，添加入9％生理盐水。

所述川芎嗪可以以液体的形式加入，也可以以干粉的形式加入。

本发明提供的心肌细胞保存液用于保存心肌细胞，在12小时以内细胞存活率为85％以上，甚至达到95％以上。

所述心肌细胞保存液可用于保存心肌细胞，特别是离体的心肌细胞，优选为离体的人心肌细胞。

本发明还保护一种保存心肌细胞的方法，是将心肌细胞悬浮于所述心肌细胞保存液，4-8℃保存12小时以下(如4-6℃保存12小时或6-8℃保存12小时)；所述心肌细胞和所述心肌细胞保存液的配比为6×10⁵-7×10⁵个心肌细胞活细胞：1mL心肌细胞保存液(如6×10⁵-6.8×10⁵个心肌细胞活细胞：1mL心肌细胞保存液，或6.8×10⁵-7×10⁵个心肌细胞活细胞：1mL心肌细胞保存液)。所述心肌细胞可为离体的心肌细胞，优选为离体的人心肌细胞。