[发明专利]一种虾苗显微注射方法

说明书

技术领域  

本发明涉及一种显微注射方法，具体是一种在显微镜下完成幼小虾苗微量体积注射的方法。

背景技术

虾属节肢动物甲壳类，体长而扁，分头胸部和腹部，体表有石灰质的外骨骼，甲壳质地坚厚。在水产养殖研究领域，常常需要将外源物质(如外源基因、DNA片段、RNA片段和蛋白质等)快速简便的注射到虾体内。但虾类动物个体较小，尤其是刚孵化的虾苗，体长仅有几毫米，外壳润滑，活泼好动，弹跃迅捷，不易进行抓捕和注射操作。

目前，常用的一次性注射器型号规格一般使用毫升级注射器。对虾苗个体而言，注射体积大，针头粗，穿刺创口面积大，注射后极易造成动物个体的死亡。用于细胞穿刺的显微注射仪使用纳米级毛细管作为注射针材料，穿刺创口小，细胞损伤小，可实现纳升级注射。但是，整个显微注射装置组件繁多，装备精密，不易随身携带，不能直接用于活体虾苗体内注射。

发明内容

本发明的目的就是针对现有技术的不足，提供一种活体虾苗体内穿刺和微量液体的高精度注射方法。

本发明方法包括以下步骤：

步骤(1).取外源注射样品，利用手动微操作仪和纳升微量注射器，将定量液体吸取在纳升微量注射器的显微注射针内；

步骤(2).将虾苗置于水平台面上，吸干甲壳外水分，然后将虾苗置于铺有纱布的培养皿中，虾体腹部朝上，将培养皿移至显微镜视野中，调节焦距使注射动物图像清晰；

步骤(3).调节显微注射针的针头进入显微镜视野，并确定针头和虾体在立体显微镜的同一视野内；通过手动微操作仪调节显微注射针位置，确定腹膜皮下组织注射穿刺点，穿刺点位置为虾体头胸部与腹部交接处；

步骤(4).显微注射针的针头进入穿刺点的腹膜皮下组织进行体内药液的微量注射，手动微操作仪上预先设定每次注射量和注射速度；微量注射方法采用微流体输送方法，以自动送料的形式将注射液体从显微注射针压到注射针口，输送到穿刺点的腹膜皮下组织区域；

步骤(5).根据手动微操作仪界面显示结果，确认注射完成后，注射液体进入虾体内后停留1～3秒钟，等待注射液体扩散；调节手动微操作仪，使显微注射针退出穿刺点的腹膜皮下组织；

步骤(6).培养皿水平移出显微镜视野，将虾苗放回水体中。

本发明方法利用手动微操作仪和纳升微量注射器以自动送料的形式将注射液体从显微注射针压到注射针口，输送到虾体腹膜皮下组织区域。注射过程中，液体试剂的输送、吸持定位、注射针进针、腹膜穿刺、体内药液定量注射、注射针退出动物体内等显微操作过程完全实现在立体显微镜的同一视野内的精确控制，实现微量液体的高精度注射。本发明操作方法简单、注射创口小、注射成功率高。

具体实施方式

一种虾苗显微注射方法，具体步骤包括：

步骤(1).取外源注射样品，利用手动微操作仪和纳升微量注射器，将定量液体吸取在纳升微量注射器的显微注射针内；

步骤(2).将虾苗置于水平台面上，吸干甲壳外水分，然后将虾苗置于铺有纱布的培养皿中，虾体腹部朝上，轻轻按住头胸甲的额部以及虾体尾部，固定虾体防止其弹跳，将培养皿移至显微镜视野中，调节焦距使注射动物图像清晰；

步骤(3).调节显微注射针的针头进入显微镜视野，并确定针头和虾体在立体显微镜的同一视野内；通过手动微操作仪调节显微注射针位置，确定腹膜皮下注射穿刺点，穿刺点位置为虾体头胸部与腹部交接处；

步骤(4).显微注射针的针头进入穿刺点的腹膜皮下组织进行体内药液的微量注射，手动微操作仪上预先设定每次注射量和注射速度；微量注射方法采用微流体输送方法，以自动送料的形式将注射液体从显微注射针压到注射针口，输送到穿刺点的腹膜皮下组织区域；

步骤(5).根据手动微操作仪界面显示结果，确认注射完成后，注射液体进入虾体内后停留1～3秒钟，等待注射液体扩散；调节手动微操作仪，使显微注射针退出穿刺点的腹膜皮下组织；

步骤(6).培养皿水平移出显微镜视野，轻轻放开虾苗，将虾苗放回水体中。