[发明专利]测定细胞培养液及细胞提取物中的NNK及其代谢物的液质联用方法

说明书

 

技术领域

本发明涉及毒理学及生物化学分析领域，具体为一种分析4-(甲基亚硝基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)的细胞毒性的中性红法及测定细胞培养液及细胞提取物中的NNK及其代谢物的液质联用方法。

 

背景技术

烟草特有亚硝胺(Tobacco-Specific Nitrosamines，TSNAs)是一类仅存在于烟草及烟气中的氮亚硝胺类化合物。TSNAs属于器官特异性致癌物质，其作用的主要靶器官是肺部组织。TSNAs可诱导实验动物产生多种癌症，其中NNK和NNN的致癌性最为强烈（施应选．烟叶和烟气中TSNAs的含量分析及其与前体物的关系[D]．云南：云南师范大学，2006：15．），国际癌症研究组织（IARC）将NNK定为一类致癌物（Smokeless tobacco and tobacco-specific nitrosamines. IARC monographs on the evaluation of carcinogenic risks to humans, vol. 89. Lyon (FR): IARC, 2007.）。生物实验表明NNK是大鼠肺癌的强烈致癌剂（Brunnemann K, Hoffmann D. Analytical studies on tobacco-specific N-nitrosamines in tobacco and tobacco smoke[J]. Critical reviews in toxicology, 1991, 21(4): 235-240.）。NNK和它的主要代谢物NNAL是烟气中唯一已知的胰腺癌致癌物（Hecht S S, Chen C B, Ohmori T, Hoffmann D. Comparative carcinogenicity in F344 rats of the tobacco specific nitrosamines, N'-nitrosonornicotine and 4-(N-methyl-N-nitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone [J]. Cancer Res, 1980, 40: 298-302；Hecht S S, Hoffmann D. The relevance of tobacco-specific nitrosamines to human cancer[J]. Cancer Surv.1989, 8: 273-294.）。NNK需要通过代谢活化才能表现其致癌性，对NNK进行体内体外代谢研究可以进一步阐明烟草引发癌症的机制，并为后续癌症预防研究提供技术支持。

在有机体一切代谢活动与执行功能的过程中，细胞呈现为一个独立、有序、自动控制性很强的代谢体系（翟中和，王喜忠，丁明孝．细胞生物学[M]．北京：高等教育出版社，2000．），是代谢与功能的基本单位。用细胞进行体外毒理试验具有耗时短并且成本低的特点，测定体外细胞毒性可以大大减少活体动物毒理学测定时的动物数量，并可为确定后续染毒及分离分析试验的剂量提供依据。细胞毒性试验的多种方法中，中性红法检测结果与体内LD₅₀的相关性好，结果稳定可靠，灵敏性也较高（王征，张天宝，朱玉平，等．急性毒性体外筛选方法的比较[J]．卫生研究，2006，35(3)：286-288；隋海霞，高芃，张立实，等．保健食品快速筛选试验-细胞毒性方法的确定[J]．中国食品卫生杂志，2004，16(6)：485-488．）。