[发明专利]一种从空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种从空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法。

背景技术

空柄牛肝素A是一种二萜类化合物，分子式为C₃₀H₄₂O₈，分子量为530.66，主要存在于牛肝菌科空柄假牛肝的子实体中。药理研究表明，空柄牛肝素A具有抗真菌活性。

目前，对空柄牛肝素A的研究较少，经检索，尚未发现适宜于大量制备空柄牛肝素A的工业化方法的公开报道。

发明内容

针对上述情况，本发明的目的是提供一种从空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

（1）将空柄假牛肝原料粉碎成粗粉，以75-90%乙醇为提取溶媒进行回流提取1-2次，过滤得到提取液；

（2）提取液加活性炭搅拌，40-60℃温度下保温脱色20-60min，过滤，得到脱色液；

（3）脱色液浓缩至相对密度为1.05-1.12，通过3000-10000道尔顿的中空纤维超滤膜，操作压力为0.1-0.3MPa；

（4）透过液经预处理好的大孔吸附树脂吸附，先用水和15-30%乙醇溶液洗脱，再用3-6BV60-75%乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得到粗品；

（5）粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相色潽仪，紫外在线监测，检测波长209nm，收集目标流分，真空干燥得到空柄牛肝素A。

所述步骤（2）中活性炭为药用活性炭，加入量为药材量的0.5-2%。

所述步骤（4）中大孔吸附树脂型号可选AB-8、HP20、HZ841或LDA-10型等。

所述步骤（5）中流动相为乙腈-水，体积比为（48-55）：（52-45），流速20-50ml/min。

本发明的有益效果是：采用大孔树脂吸附洗脱，提高了产品的纯度；采用反相高效液相色潽法精制纯化，纯度高达98%以上，所得产品可作为对照品使用，同时可进行大量制备；本发明工艺稳定，可用于工业化生产。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步说明。

实施例1：

将空柄假牛肝原料粉碎，称取1000g，加入相当于原料量3倍的80%乙醇溶液回流提取2次，每次2h，过滤得到提取液，加活性炭搅拌，45℃温度下保温脱色40min，过滤，得到脱色液，浓缩至相对密度为1.12，通过10000道尔顿的中空纤维超滤膜，操作压力为0.3MPa，透过液上AB-8大孔吸附树脂柱，依次用水洗脱至洗脱液流出无色、用20%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用3BV75%乙醇溶液洗脱，收集75%乙醇洗脱液，浓缩干燥得到粗品。将空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，乙腈-水（48:52）为流动相，流速35ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长209nm，连续进样，收集含有空柄牛肝素A的高纯度流分，浓缩干燥得产品112mg，含量为98.6%。

实施例2：

将空柄假牛肝原料粉碎，称取1000g，加入相当于原料量5倍的75%乙醇溶液浸回流提取2次，每次1h，过滤得到提取液，加活性炭搅拌，50℃温度下保温脱色40min，过滤，得到脱色液，浓缩至相对密度为1.10，通过6000道尔顿的中空纤维超滤膜，操作压力为0.3MPa，透过液上HZ841大孔吸附树脂柱，依次用水洗脱至洗脱液流出无色、用30%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用5BV75%乙醇溶液洗脱，收集70%乙醇洗脱液，浓缩干燥得到粗品。将空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，乙腈-水（48:52）为流动相，流速20ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长209nm，连续进样，收集含有空柄牛肝素A的高纯度流分，浓缩干燥得产品107mg，含量为98.9%。

实施例3：