[发明专利]一种纯化紫穗槐螺酮的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种采用高速逆流色谱技术纯化紫穗槐螺酮方法。

背景技术

紫穗槐螺酮来源于豆科紫穗槐（Amorpha fruticosa L.）的干燥叶。紫穗槐原产美国。广布于中国东北、华北、河南、华东、湖北、四川等省（区），是黄河和长江流域很好的水土保持植物。

紫穗槐叶主要有效成分为黄酮类化合物，以紫穗槐螺酮单体为主要活性成分。紫穗槐螺酮具有细胞毒活性，有显著的选择性细胞毒活性，对KB和RPMI-7951细胞的ED₅₀分别为（μg/ml）0.58和0.61。对TPA诱导的EB病毒早期抗原（EBV-EA）有显著抑制作用，其活性于VA酸和甘草次酸相当。

目前，尚未发现制备高含量紫穗槐螺酮的方法报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种纯化紫穗槐螺酮方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于：取紫穗槐叶粉碎，加7-10倍量70-80%乙醇回流提取2-3次，提取液静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩，注入高速逆流色谱仪，根据紫外检测器图谱收集目标成分，浓缩，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥即得紫穗槐螺酮。

所述的回流温度为70-100℃。

所述的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统体积比为3-5:2-4:4-7:2-5，上相为固定相，下相为流动相。

本发明优势在于：采用高速逆流色谱分离，分离过程无产品损失，制备周期短，制备量大，易操作，克服了传统填充柱分离过程中样品死吸附、工艺繁琐、重现性差的技术缺陷。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1： 

取紫穗槐叶粉碎，取5kg，加7倍量80%乙醇溶液，在70℃温度下回流提取3次，合并两次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为3:2:4:2混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为700rpm，同时以10ml/min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为2ml/min，注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗槐螺酮6.6g，经HPLC检测，含量为95.4%。

实施例2：

取紫穗槐叶粉碎，取5kg，加8倍量75%乙醇溶液，在80℃温度下回流提取3次，合并两次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为5:4:7:5混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为800 rpm，同时以10ml/min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为3ml/min，注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗槐螺酮6.8g，经HPLC检测，含量95.1%。

实施例3：

取紫穗槐叶粉碎，取5kg，加8倍量75%乙醇溶液，在100℃温度下回流提取2次，合并两次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为3:4:7:2混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为750rpm，同时以10ml/min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为1.5ml/min，注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗槐螺酮7.2g，经HPLC检测，含量93.8%。

实施例4：