[发明专利]检测马脑炎病毒抗体的金标免疫试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测马脑炎病毒抗体的金标免疫层析系统，其特征在于，该金标免疫层析系统包括用于定量检测的金标免疫分析仪、用于检测东方马脑炎病毒抗体的金标免疫试纸条A、用于检测西方马脑炎病毒抗体的金标免疫试纸条B、用于检测委内瑞拉马脑炎病毒抗体的金标免疫试纸条C，三个试纸条均包括反应支撑物、紧密连接于反应支撑物上表面中部的硝酸纤维膜，硝酸纤维膜起始端的上表面与吸水垫部分重叠连接、硝酸纤维膜末端的上表面与金标抗体保护膜部分重叠连接，金标抗体保护膜的上表面部分重叠连接有样品垫；

其中，金标免疫试纸条A中的金标抗体保护膜包括膜本体、及均匀涂布在其上的金标标记的金黄色葡萄球菌A蛋白或重组东方马脑炎病毒 E1C抗原涂层，硝酸纤维膜上靠近其起始端处设置有羊抗兔IgG或兔抗东方马脑炎病毒IgG包被的质控条带、靠近其末端处设置有东方马脑炎抗原包被的检测条带；

金标免疫试纸条B中的金标抗体保护膜包括膜本体、及均匀涂布在其上的金标标记的金黄色葡萄球菌A蛋白或重组西方马脑炎病毒 E1C抗原涂层，硝酸纤维膜上靠近其起始端处设置有羊抗兔IgG或兔抗西方马脑炎病毒IgG包被的质控条带、靠近其末端处设置有西方马脑炎病毒抗原包被的检测条带；

金标免疫试纸条C中的金标抗体保护膜包括膜本体、及均匀涂布在其上的金标标记的金黄色葡萄球菌A蛋白或重组委内瑞拉马脑炎病毒E抗原涂层，硝酸纤维膜上靠近其起始端处设置有羊抗兔IgG或兔抗委内瑞拉马脑炎病毒IgG包被的质控条带、靠近其末端处设置有委内瑞拉马脑炎病毒抗原包被的检测条带。

2.如权利要求1所述的金标免疫层析系统，其特征在于，所述金标免疫试纸条A、金标免疫试纸条B和金标免疫试纸条C并排一体制成。

3.如权利要求2所述的金标免疫层析系统，其特征在于，所述反应支持物为PVC板，吸水垫为滤油纸；所述金标抗体保护膜为玻璃纤维膜、聚脂膜或滤纸纤维。

4.如权利要求2所述的金标免疫层析系统，其特征在于，所述样品垫为玻璃纤维膜、聚脂膜或滤纸纤维。

5.如权利要求2所述的金标免疫层析系统，其特征在于，所述金标免疫试纸条A、金标免疫试纸条B和金标免疫试纸条C整体的外部各自包裹设置有外壳，该外壳上对应于所述样品垫处设置有样品孔，外壳上对应于所述质控条带、检测条带处设置有观察窗。

6.一种如权利要求1所述金标免疫试纸条的制备方法，其特征在于，该制备方法具体为：

1） 制备胶体金；

2） 利用制得的胶体金分别标记相应的金黄色葡萄球菌A蛋白或重组东方马脑炎病毒 E1C抗原、金黄色葡萄球菌A蛋白或重组西方马脑炎病毒 E1C抗原、金黄色葡萄球菌A蛋白或重组委内瑞拉马脑炎病毒E抗原；

3） 用隔流喷金划线机以设定喷膜速度分别将羊抗兔IgG或兔抗东方马脑炎病毒IgG喷涂到硝酸纤维膜一的起始端以形成质控条带一、将羊抗兔IgG或兔抗西方马脑炎病毒IgG喷涂到硝酸纤维膜二的起始端以形成质控条带二、将羊抗兔IgG或兔抗委内瑞拉马脑炎病毒IgG喷涂到硝酸纤维膜三的起始端以形成质控条带三，将重组马脑炎蛋白喷涂到三个硝酸纤维膜的末端以形成相应的检测条带；

4） 将步骤2）中制得的胶体金标记的三种蛋白或抗原分别均匀涂布在三个玻璃纤维膜上，并烘干或冷冻干燥，制成三个相应的金标抗体保护膜；

5） 在反应支撑物上表面中部设置步骤3）中的三个硝酸纤维膜，三个硝酸纤维膜起始端的上表面分别与相应的吸水垫部分重叠连接，三个硝酸纤维膜末端的上表面与相应的金标抗体保护膜部分重叠连接，金标抗体保护膜的上表面部分重叠连接相应的样品垫；

6） 将步骤5）中形成的包含三个试纸条的试纸切成规格大小的形状，进行干燥、装壳，以形成试纸条。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中制备胶体金的具体步骤为：

1） 制备HAuCl₄水溶液：磁力搅拌下加入HAuCl₄，同时加入柠檬酸三钠水溶液，颜色稳定后继续加热，冷却至室温后加纯水补足至设定值，4 ℃避光保存；

2） 用K₂CO₃调pH值为6.0-6.4；

3） 将胶体金调至pH 6.0-6.4，用PB 稀释 SPA 至0.2 mg/ml；

4） 保持胶体金稳定。