[发明专利]一种白鹤芋体细胞胚诱导并再生植株的方法

说明书

 

技术领域

本发明涉及植物诱导再生技术领域，具体地说，涉及一种白鹤芋体细胞胚诱导并再生植株的方法。

背景技术

白鹤芋（Spathiphyllum Schott）为又称白掌或一帆风顺，原产中南美洲，是重要的热带观赏植物，在欧美市场备受欢迎。上世纪80年代引入我国大陆，迅速发展形成产业，成为我国最重要的热带观赏植物之一。

白鹤芋植物组织培养自20世纪70年代以来相继有所报道，主要利用顶芽和茎段等外植体诱导获得丛生芽，以丛生芽增殖的方式扩大繁殖数量，再以生根培养获得完整植株，其目的是实现离体快速繁殖，扩大稀有品种资源的个体数量，满足育种和生产的需要。

曹静等（1995）和朱根发（2004）以幼嫩佛焰苞花序为外植体，经培养获得体细胞胚并再生植株。Werbrouck等（2000）、Eeckhaut T等（2001）和秦静远（2005）等报道了用幼嫩佛焰苞花序进行培养时，从雄蕊花丝部位诱导产生了体细胞胚。这些诱导体细胞胚的培养材料均为花器官，属生殖器官组织。从报道看诱导体细胞胚的效率比较低，一般每个外植体上只能产生单个或十几个体细胞胚；外植体的采集也需在开花季节，受到植物生长发育时限限制较大。

目前，在白鹤芋上还未见从营养器官如叶片或叶柄等外植体成功诱导体细胞胚并再生植株的报道。

发明内容

本发明的目的是对白鹤芋体细胞胚诱导植株再生技术从材料和方法上进行创新，提供一种以营养器官—幼嫩试管苗叶片或叶柄作为外植体，高效率的诱导体细胞胚并再生植株的方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种白鹤芋体细胞胚诱导并再生植株的方法，利用外植体材料诱导，所采用的外植体材料为白鹤芋幼嫩试管苗叶片或叶柄。具体包括如下步骤：

（1）

后柱体细胞胚诱导。取白鹤芋属植物S. cannifolium的茎段或顶芽，经消毒处理，接种至丛生芽诱导培养基中，获得无菌的试管苗，然后转移至试管苗增殖培养基中，在温度24~30 ℃、光照强度为1000~1400 lux，每日10~14小时光照的环境中，每3-4周继代一次，试管苗不断增殖。将幼嫩试管苗叶片切成1~10毫米宽的条块，或将叶柄切成1~10毫米的截段，然后接种于体细胞胚诱导培养基中，在温度24~30 ℃的黑暗环境中培养3~6周，获得体细胞胚。  

（2）体细胞胚的增殖。将获得的体细胞胚继代培养于体细胞胚增殖培养基中，在温度24~30 ℃的黑暗环境中培养2~4周后，体细胞胚大量增殖。

（3）植株再生。将获得的体细胞胚接种至植株再生培养基中，在温度24~30 ℃、光照强度为1000~1400 lux，每日10~14小时光照培养2~4周，体细胞胚萌发，获得完整再生植株。