[发明专利]与SCOS3基因相关的胶质母细胞瘤生存预后试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及疾病诊断领域，特别是涉及用于胶质母细胞瘤生存预后试剂盒。

背景技术

胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme，GBM)是成人最为常见的原发性脑肿瘤，其生存预后极差，患者中位生存期约为12-14个月。尽管手术、放疗和化疗技术不断进步，但这一指标在过去20年内从未得到明显改善[1，2]。Esteller的研究小组[3]首先报道了恶性胶质瘤中MGMT基因高甲基化对烷化剂治疗敏感性和生存预后的关系。MGMT基因甲基化状态是第一个可用于评估恶性胶质瘤临床预后的分子标记物，MGMT基因沉默与替莫唑胺(temozolomide，TMZ)疗效相关。GBM患者如果存在MGMT基因高甲基化，接受烷化剂TMZ化疗后2年生存率将从26％显著提高至46％[4]。这项里程碑式的发现是恶性胶质瘤治疗领域近35年来取得的最重要进展，使人们对GBM的治疗理念发生了巨大的转变。

在肿瘤起源与进展过程中，癌症相关基因的DNA编码区发生表观遗传学异常非常多见，尤其是甲基化导致抑癌基因的表达沉默[5，6]。在肿瘤细胞周期、侵袭、凋亡或DNA修复过程中，位于基因启动子区的CpG岛甲基化异常往往与基因的转录沉默相关[5，6]。目前在GBM中已经发现DNA甲基化可以导致多种基因的表达沉默，涉及的重要细胞功能包括细胞周期(p16INK4a，p15INK4b)、DNA修复和基因组完整性(MGMT，MLH1)、肿瘤抑制(RB1，VHL，EMP3，RASSF1A，BLU)、以及肿瘤侵袭和凋亡(DAPK，TIMP3，CDH1，PCDH-gamma-A11，TMS1/ASC，CASP8)等等[7-13]。

细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3，SOCS3)是细胞信号转导生理抑制剂家族最活跃的成员之一，是JAK/STAT信号转导通路中最重要的抑制因子，通过负性调节该通路及其下游原癌基因STAT3的信号转导，可阻止细胞的恶性转化及凋亡抑制，其激活和表达具有潜在的抑制肿瘤作用。多种细胞因子通过JAK/STAT信号转导途径诱导SOCS基因表达，SOCS蛋白通过最终抑制酪氨酸磷酸化过程反馈抑制STAT介导的信号通路，发挥抑制肿瘤细胞生长的作用。大量研究表明，SOCS3基因在肺癌、卵巢癌、肝癌和T细胞淋巴瘤等[14，15]多种人类肿瘤组织及细胞系中出现甲基化异常，提示SOCS启动子区异常甲基化造成的表达沉默在肿瘤的发生、发展、演进过程中发挥重要作用。

本发明在此报道SOCS3作为在胶质母细胞瘤中作为新的诊断和预后生物标志物和潜在的治疗剂靶标的鉴定，还提供了其在胶质母细胞瘤发生中的应用。

发明内容

因此，本发明涉及与胶质母细胞瘤相关的甲基化表达水平的发现，以及开发人胶质母细胞瘤预后的靶标的发现。

在本发明的一个实施方式中提供一种用于胶质母细胞瘤生存预后试剂盒，其特征在于所述试剂包括：(1)从原发性胶质母细胞瘤患者的肿瘤组织样品中提取DNA的试剂盒和任选地所述提取DNA的试剂盒使用说明书；和(2)分析所述提取DNA中的基因SOCS3的甲基化水平的试剂盒和任选地所述基因SOCS3的甲基化水平的试剂盒的使用说明书。

在本发明的另一个实施方式中，提供一种用于胶质母细胞瘤生存预后试剂盒，其中所述试剂盒进一步地包括检测SOCS3基因中CpG位点甲基化水平的试剂盒。

在本发明的另一个实施方式中，检测SOCS3基因中CpG位点甲基化水平的试剂盒包括检测SOCS3基因CpG位点cg19224278、cg23191950或cg26509022中的至少一个的甲基化水平的试剂盒。在还更一个实施方式中，检测SOCS3基因中CpG位点甲基化水平的试剂盒包括检测SOCS3基因CpG位点cg27637521的甲基化水平。

在本发明的更进一步实施方式中，分析所述提取DNA中的基因SOCS3的甲基化水平的试剂盒是DNA芯片甲基化芯片试剂盒。在本发明的更进一步实施方式中，所述检测SOCS3基因中CpG位点甲基化水平的试剂盒是甲基化焦磷酸测序试剂盒。

在本发明的更进一步的实施方式中，检测SOCS3基因检测用PCR引物和测序引物为：生物素-TTYGGGGTAGTGGGTGTTTTAGT；CACTACRTTCACCACCAACTAATACT  ；  和AAAAACTTACTATAAATAACCAT。