[发明专利]一种建立康地6号油葵再生体系的方法

说明书

发明领域

本发明涉及生物技术领域，具体说，本发明具体涉及一种建立油葵再生体系的技术领域。

背景技术

向日葵(Helianthus annuus L.)是世界四大油料作物之一，也是我国北方地区的主要油料作物，其作为油料或蛋白质资源日益受到人们的重视。组织培养不仅可生产大量的优良无性系，也可打破种属间的界限，克服远缘杂交及不亲和性障碍在向日葵新品种的培育和种性的改良中和基因工程技术的发展和应用中有着巨大的潜力。尽管向日葵植株再生方法已经得到长足发展，各种技术也已有报道，由于向日葵属于难培养植物，有许多因素制约着向日葵的植株再生。

幼胚培养技术在向日葵获得成功的报道越来越多。李映红等(李映红、郭仲琛、王伏雄.Immature embryo culture of sunflower[J].Acta Botanica Yunnanica(云南植物研究)，1998，10(1)：79-86)、Finer(Finer J J.Direct somatic embryogenesis and plant regeneration from immature embryos of hybrid sunflower(Helianthus annuus L.)on a high sucrose containing medium[J].Plant Cell Rep.，1987，6：372-374)、Freyssin等(Freyssinet M，Freyssinet G.Fertile plant regeneration from sunflower(Helianthus annuus L.)immature embryos[J].Plant Sci.，1988，56：177-181)、宋英凯等(宋英凯，张天星，崔国惠，等.向日葵未成熟胚培养中不定芽的发生〔J).华北农学报，1993，8(2)：112-115.〕刘海学(刘海学，季静，王萍，等.向日葵未成熟胚组织培养及再生芽的研究(J).内蒙古民族大学学报(自然科学版)，2003，18(5)：411-414.)都报道了在向日葵幼胚培养中体细胞胚胎的发生，从未成熟的合子中诱导出愈伤组织再由愈伤组织发生体细胞胚胎的间接途径，但再生器官的发生率不是很高，一般在2·5％-12％，而且形成的芽不易生长成植株，并且幼胚的获得还限制与生长季节，如在冬季使用温室将增加很多管理和种植成本。并且直到现在利用幼胚向日葵植株体细胞胚胎的再生仍然很困难，即使能再生重复前人试验也特别难。

在向日葵器官培养方面，Baker利用子叶(Baker M C，Munoa-Fernandez N，Carter C D.Improved shoot development and rooting from mature cotyledons of sunflower[J].Plant Cell，Tissue and Organ Culture，1999，58：39-49.)建立向日葵再生体系，包括无菌苗种到1/2MS培养基附加15g/L蔗糖+6g/L琼脂。取无菌苗切取子叶节接到MS培养基附加0.5mg/L NAA+1mg/L6BA诱导愈伤4周，芽诱导利用MS培养基附加0.5mg/L NAA+1mg/L6 BA，然后转移到MS培养基上分化，MS培养基附加0.5mg/L BA+0.01mg/L NAA。最高能产生平均87％不定芽分化，每个子叶节最高产生5.4个芽。生根培养基利用1/2MS并附加少量的NAA和炭粉。Puniam等利用MS培养基附加0.5mg/L BA+0.05mg/LNAA组合诱导出向日葵子叶节，叶片，茎尖，下胚轴等不同外置体愈伤，继而在MS培养基附加0.5mg/L BA+0.1mg/L GA3+500mg/L CA分化培养基上得到分化不定芽，分化频率不同品种在5-80％不等，最后通过无激素MS培养基生根得到全苗。上述国外报道都利用不同的材料和激素配比，所得的结果也不尽相同，我们也利用过自己材料及其上述报道培养基无法得到相似的结果。而且有些向日葵品种生根非常困难。因此国外的向日葵再生体系由于所用材料不同很难加以有效利用。