[发明专利]一种乌骨藤皂苷的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于对乌骨藤皂苷胶囊中多种活性成分的检测方法，属于生物医药领域范畴。

背景技术

肿瘤是世界卫生组织认定危害人类生命的第一大杀手，近年来发病率呈总体上升趋势。目前抗肿瘤药大都是通过化学合成得到的，虽然疗效较好，但毒副作用很大。因此，开发出高效、低毒的天然抗肿瘤药物具有重要的社会意义。

乌骨藤又名通光藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.，始载于《滇南本草》，性味苦，微寒，清热解毒、散结止痛等功效，临床具有很好的抗肿瘤疗效，以乌骨藤为原药材生产的消癌平制剂在临床上得到了广泛的应用，主要用于食道癌、胃癌、肺癌的治疗，但由于乌骨藤化学成分复杂，原有的工艺水平较落后，因此，对于乌骨藤药材中真正具有抗癌活性的成分并不清楚，活性成分不明确，导致乌骨藤的临床制剂中杂质多，临床用量很大(片剂每日用量多达30片)，不但给患者用药带来很多的不便，而且由于对真正活性成分没有明确的控制指标，导致药品的有效性难以保证。

本专利发明人已经从乌骨藤化学成分研究入手，结合药效学筛选的方法，从乌骨藤中分离纯化得到的其中真正具有良好抗肿瘤活性的物质是乌骨藤皂苷，并已经申请了发明专利《乌骨藤皂苷H及其制备方法与应用》，申请号为200910234622.X。研究表明，乌骨藤皂苷具有显著的抗肿瘤活性，疗效稳定、确切，毒副作用很低。但由于乌骨藤皂苷成分较多，而且结构非常类似，同时由于乌骨藤皂苷在紫外光区没有显著的特征吸收，因此很难对其中化学成分含量进行精密准确的测定，而准确的测定乌骨藤皂苷中各个主要皂苷成分的含量是对乌骨藤皂苷质量控制的必要保障，因此采用科学的技术手段对其进行含量测定具有十分重要的意义。

目前公开的对乌骨藤皂苷质量控制的专利或文献不多，如刘傲镭等于《华西药学杂志》2007年第3期上发表的《HPLC-ELSD鉴别不同产地通光藤的皂苷类成分》一文中，提供了一种对乌骨藤皂苷质量控制的方法，但该方法是对乌骨藤皂苷的一种用于定性控制的鉴别方法；何俊等在《华西药学杂志》2008年第二期上发表的《不同产地的通光藤中总皂苷含量的比较》一文中，提供的仍然是对乌骨藤的药材进行的定性鉴别。在《中华中医药学刊》2010年第二期刊登的《RP-HPLC法测定乌骨藤药材中Tenacissoside B的含量》，公开了一种用反相高效液相色谱法检测乌骨藤皂苷B含量的方法，选用的检测器是紫外检测器，由于乌骨藤皂苷在紫外光区无特征吸收，因此选用该方法检测必定会有专属性差、误差大的缺点。李华丽，卢燕，胡嘉蕴，陈道峰在《中国中药杂志》2010年第16期发表的《HPLC-ELSD测定通关藤中通关藤苷H的含量》提供了一种检测通关藤药材中通关藤皂苷H的含量的方法，其方法只是针对通关藤药材中通关藤皂苷H的检测，不能控制其他化学成分的含量。

本发明目的在于运用现代色谱技术，提供一种一次性同时检测乌骨藤皂苷胶囊中多种皂苷含量的检测方法，用于对乌骨藤皂苷胶囊的质量控制，为产品的质量和疗效提供保障。本方法精密度好，重现性好，具有很强的实用性。

在上述及其他公开的文献与专利中，提供的检测方法与本发明提供的检测方法和检测目标有本质区别。

发明内容

本发明采用高效液相色谱技术，运用蒸发光散射检测器，同时测定乌骨藤皂苷胶囊中乌骨藤皂苷A、B、D、H的含量，本方法具良好的精密度、稳定性和重现性，可同时测定乌骨藤皂苷中多种活性成分的含量，可用于对乌骨藤皂苷胶囊的质量控制，为乌骨藤皂苷胶囊的质量提供保障。

根据本发明的比较优选的实施方案，检测方法包括以下步骤：

(1)色谱条件：在一定环境温度和相对湿度条件下，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以一定浓度配比的有机溶剂-水溶液为流动相，控制流速和柱温。选用蒸发光散射检测器，并控制检测器参数。

(2)对照品溶液的制备：分别精密称取对照品(1)乌骨藤皂苷A、对照品(2)乌骨藤皂苷B、对照品(3)乌骨藤皂苷D、对照品(4)乌骨藤皂苷H适量，置量瓶中，加适量溶剂溶解并定容，制成一定浓度的混合对照品溶液。

(3)供试品溶液的制备：称取乌骨藤皂苷胶囊内容物适量，加入适量有机溶剂超声溶解、滤过、放冷，定容，制成一定浓度的供试品溶液。

(4)测定法：精密吸取对照品、供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。