[发明专利]一种实时荧光RT-PCR检测脊髓灰质炎病毒的试剂盒

说明书

 

技术领域

本发明涉及脊髓灰质炎病毒检测技术，具体地说，涉及一种实时荧光RT-PCR检测脊髓灰质炎病毒的试剂盒。

背景技术

脊髓灰质炎(poliomyelitis)是一种古老的疾病，是由脊髓灰质炎病毒引起的一种急性传染性疾病，其临床表现多种多样，主要有发热、咽痛和肢体疼痛等，部分病人可发生弛缓性麻痹。脊髓灰质炎病人，由于脊髓前角运动神经元受损，与之有关的肌肉失去了神经的调节作用而发生萎缩，同时皮下脂肪，肌腱及骨骼也萎缩，使整个机体变细。流行时以隐匿感染和无瘫痪病例为多。由于儿童发病比例较成人为高，在普种疫苗前以婴幼儿患病为主，故又称小儿麻痹症（Infantile paralysis）。

人是脊髓灰质炎病毒唯一的自然宿主，本病通过直接接触传染，是一种传染性很强的接触性传染病，隐形感染者以及轻症瘫痪型病人是本病的主要传染源，在大规模流行时，隐性感染与临床病例的比例超过100:1。脊髓灰质炎病毒以粪-口感染为主要传播方式，发病前3~5天至发病后1周患者鼻咽部分泌物及粪便均可排出病毒，少数病倒粪便带毒时间可长达3~4月；密切生活接触，不良卫生习惯都可导致病毒的大面积扩散。

脊髓灰质炎的感染以隐性感染（占99％以上）为主，以发热，咽痛，肢体疼痛等非特异性症状为主要临床表现，严重可以出现瘫痪以及机体萎缩等前角神经元受损的症状。瘫痪病例中，90%以上发生于5岁以前。经济发达的国家和地区环境卫生和个人卫生习惯的进步导致感染的年龄往往推迟，年长儿和青年人仍然是易感者，目前夏季流行在年长小儿中呈现一定的上升趋势。

本病广泛分布于全世界，温带地区流行高峰在5~10月，热带地区终年可见。1988年世界卫生组织提出2000年全球消灭脊髓炎，1989年又提出消灭本病的行动计划，由于减毒活疫苗的应用，发病率已明显下降。虽然我国已经响应世界卫生站组织号召进行了强制接种免疫，但是我国仍为流行地区。且近些年来，脊髓灰质炎减毒疫苗突变导致的脊髓灰质炎感染事件时见报道，而水产食品以及蔬菜引发的脊髓灰质炎病毒感染已经引起食品安全部门的关注。

脊髓灰质炎病毒的核酸为单股正链RNA，已知基因组的长度约为7.5kD。按其抗原性不同，将脊髓灰质炎病毒分为1、2、3等3个血清型。它们的理化性质基本相同，RNA的碱基组成也很相似。以上3个血清型的病毒RNA之间在核苷酸水平上有36％～52％的同源性。三种血清型的病毒都可以致病，其中导致瘫痪病例的主要是1型。脊髓灰质炎初起时与伤风感冒相类似，与其他病毒(柯萨奇病毒、埃可病毒、EB 病毒、流行性腮腺炎病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、流行性乙型脑炎病毒)感染所致的脑膜炎、化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、真菌性脑膜炎以及脑膜炎型钩端螺旋体病等相鉴别。以及感染性多发性神经根炎或称格林-贝尔综合征（Guillain-Barre＇s syndrome）临床不易鉴别。目前对于脊髓灰质炎的临床实验室检测主要分为三种，包括病毒分离培养，血清学检测以及核酸检测，其中以血清学和核酸检测为主要手段，血清学检测的诊断指标为 发病后1个月内从患者脑脊液或血中查到抗脊髓灰质炎病毒IgM抗体者；或恢复期患者血清中特异性IgG抗体滴度比急性期有4倍升高者；或脑脊液中特异性IgG抗体明显升高，血液与脑脊液IgG抗体滴度比例失常或倒置(在血脑屏障无损伤时，血：脑脊液为200—400：1)者均有诊断价值。相对来说抗体的产生虽然具有诊断价值，但是对感染的早期判断一般采取更敏感快速的PCR方法进行诊断。