[发明专利]一种新型幽门螺旋杆菌多表位疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及到一种新型幽门螺旋杆菌多表位疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡和十二指肠溃疡的重要致病因子，与胃癌密切相关，世界卫生组织(WHO)已将Hp列为I类致癌因子。幽门螺旋杆菌的感染率很高，世界人群Hp感染率超过50％，我国人群Hp感染率为58.07％，呈现家庭聚集性，形势更加严峻。目前治疗Hp感染的方法，主要基于“三联”药物疗法，其主要成分为质子泵抑制剂、抗生素和铋剂。“三联”药物疗法存在诸多弊端：(1)抗生素广泛使用，导致Hp耐药菌株日益增多，药物疗效每况日下，临床上同时使用2种或3种抗生素仍难以将其彻底根治。(2)治疗药物存在毒副作用。(3)药物治疗难以避免“反复治疗，反复感染”的尴尬局面。(4)药物价格昂贵，治疗周期长，病人依从性较差。因此，“三联”药物疗法不宜在Hp感染人群中大规模推广使用。实验研究表明，免疫接种可预防甚至治疗Hp感染，使人群获得持久性的免疫力。研制有效的预防性和治疗性Hp疫苗是控制Hp感染性疾病的一种切实有效的方法，逐渐成为国内外学者竞相研究的一个热点。

抗原表位是刺激机体产生免疫应答的基本功能单位，包括B细胞抗原表位、Th细胞抗原表位、CTL细胞抗原表位和一些不利于免疫保护作用的抗原表位。表位疫苗基于抗原表位而制备，具有独特的疫苗设计思路，是研制预防和治疗感染性疾病、恶性肿瘤和自身免疫性疾病等疫苗的新方向。表位疫苗与全菌疫苗、基因工程亚单位疫苗和DNA疫苗相比，具有以下优点：(1)表位疫苗一般稳定、无毒，具有更高的安全性。(2)抗原表位肽的分子结构小而简单，不会引起免疫抑制或者自身免疫性疾病。(3)表位疫苗可对抗原表位进行精确定位，具有更高的免疫针对性和特异性。(4)表位疫苗具有十分灵活的设计性，可组合不同Th、B细胞抗原表位，制成针对多种病原体的疫苗。(5)表位疫苗选用高保守性的抗原表位肽，可有效防止病原体快速基因突变所形成的免疫逃避机制。在Hp疫苗研究领域，表位疫苗与其他疫苗相比，同样具有很大优势，既可激发更高特异性的抗Hp抗体，又可防止疫苗免疫引起的一些自身免疫性疾病，具有更高的免疫针对性和安全性。

幽门螺旋杆菌含有丰富的尿素酶(Urease)，约占全菌体蛋白的5％～10％，在Hp内部和表面广泛表达。一般细菌难以在胃部的高酸环境中存活，但尿素酶能水解尿素产生氨来中和 胃酸，并可对胃黏膜造成病理性损伤。因此，尿素酶是Hp重要的定植因子和致病因子。尿素酶由A和B两个亚单位(UreA和UreB)组成，其中尿素酶B亚基是尿素酶活性亚单位，在各Hp菌株中具有很好的保守性，被公认为是Hp疫苗的理想候选抗原。最新实验研究表明，尿素酶A亚基同样具有较强的抗原性，针对尿素酶A亚基的Hp疫苗同样能够取得良好的保护作用。因此，尿素酶A、B双亚基都是Hp疫苗设计的理想抗原。从理论上讲，研制一种针对尿素酶A、B双亚基的Hp表位疫苗，比只针对尿素酶单亚基的Hp表位疫苗，具有更好免疫预防和治疗效果。另外，实验研究也证明天然Hp尿素酶激发的抗尿素酶抗体，不能有效抑制尿素酶活性。究其原因，Hp尿素酶抗原表位可分为两类，一类表位激发机体产生的抗尿素酶抗体，可明显抑制尿素酶活性，为中和抗体；而另一类表位激发机体产生的抗尿素酶抗体，却有助于Hp的胃部定植和病理性进程。因此，选择可激发中和抗体的尿素酶抗原表位来构建表位疫苗，可避免交叉反应产生的免疫病理性伤害，激发有效抑制尿素酶活性的抗体，有助于Hp感染性疾病的有效治疗。

本发明的思路如下：根据机体对幽门螺旋杆菌的免疫保护性机制，合理选择尿素酶A、B双亚基的B、Th细胞优势抗原表位，通过生物信息学对抗原表位的连接顺序、间隔序列和多重拷贝数，加以分析和确定，设计出一个科学合理、结构新颖的幽门螺旋杆菌多表位疫苗CTB-UE。利用Western Blot、ELISA等多种免疫学方法检测Hp多表位疫苗CTB-UE的免疫原性和免疫特异性，研究表明Hp多表位疫苗CTB-UE能够激发BALB/c小鼠产生针对尿素酶A、B双亚基的T细胞免疫应答和有效抑制Hp尿素酶活性的高滴度表位特异性抗体，具有很好的免疫原性和免疫特异性。

发明内容

本发明的第一个方面是提供了一种针对尿素酶A、B双亚基两者的Hp多表位疫苗。

本发明的第二个方面是提供了Hp多表位疫苗的制备方法。

本发明的第三个方面是公布了Hp多表位疫苗的用途。