[发明专利]分离升麻消旋体A的方法

说明书

背景技术

升麻属(Cimicifuga)的许多种已在中国、韩国和日本医学领域中被用作炎性病症的治疗剂。类似地，含有黑升麻(black cohosh)——植物学上称为总状升麻(Cimicifuga racemosa L.Nutt)(又称为类叶升麻属(Actaea racemosa)——的组合物在美国和欧洲被广泛地用作草药膳食补充品。历史上，印第安妇女将黑升麻用于治疗不适(malaise)、疟疾、风湿病、肾功能异常、咽喉痛、月经不调和与分娩相关的疾病(Blementhal et al.，2000)。在一些亚洲国家，该草药和包括兴安升麻(Cimicifuga dahurica(Turcz.)Maxim.)、升麻(Cimicifuga foetida L.)和大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia Kom.)的升麻属的其他种被用于治疗炎症、发热、头痛、疼痛、咽喉痛和受寒(Foster，1999；Kusano，2001；Kim et al.，2004)。然而，这些草药的内在作用机理仍有待充分地阐述。

黑升麻的生物学活性在过去已进行过研究。在体内，已证实黑升麻提取物以剂量依赖的方式抑制斯普拉-道来(Sprague-Dawley)大鼠体内的抗-IgE-诱导的被动皮肤过敏反应(Kim et al.，2004)。在体外，所述草药提取物在HMC-1人白血病肥大细胞中通过炎症因子(例如PMA和A2387)抑制细胞因子(包括IL-4、IL-5和TNF-α)的转录(Kim et al.，2004)。其他研究也证实了黑升麻提取物对组胺、缓激肽和COX-2介导的炎症作用的抑制效果(Kim and Kim，2000)。然而，存在于所述提取物中的活性组分是未知的。

升麻消旋体A(Cimiracemate A)为异阿魏酸和3-(30，40-二羟基苯基)-2-酮-丙醇之间所形成的酯(Chen et al.，2005)。升麻消旋体A为具有1，7-二芳基骨架的天然存在的化合物。其他具有这种1，7-二芳基骨架的化合物具有显著的生物活性(Roughley&Whiting，1973)。例如，已有报道称，姜黄素——一种从姜黄(Curcuma longa)中分离的天然色素——能抑制多种类型恶性细胞的生长(Chen et al.，1999；Aggarwal et al.，2004)并且尤其是在HIV感染的情况下(Vlietinck et al.，1998)。从益智(Alpina oxyphylla)的种子中提取的益智酮B(Itokawa et al.，1982)具有抗血胆固醇过多和动脉粥样硬化的活性(Ohishi et al.，2001)。

已发现升麻消旋体A在人巨噬细胞中抑制LPS诱导的TNF-α并抑制LPS诱导的MAP激酶活性以及特定转录因子的活化。此外，升麻消旋体A可具有另外的健康益处，其包括活性氧簇清除剂(Burdette et al.，2002)。综合考虑，具有1，7-二芳基骨架的化合物(如升麻消旋体A)可具有多种能够通过多细胞依赖性机制而起作用的生物活性。

在美国和欧洲，总状升麻的消耗量一直在显著增加。其产品以消费者目前可得的异丙醇和乙醇提取物的一系列制剂和剂量的形式制备。该草药的使用是基于提取物而非单独的生物活性组分。虽然已从总状升麻中分离了一些化合物(包括三萜苷和酚类)，但其生物活性以及在所述提取物中的一致存在性仍待确定(Kennelly et al.，2002)。

另一个经分离的总状升麻组分为23-表-26-脱氧升麻烃(deoxyactein)。该23-表-26-脱氧升麻烃组分目前用作化学标记物以使市售的总状升麻产品标准化。其使用原理为其在提取物中丰富(Pepping，1999)。因此，所述用于总状升麻提取物标准化的化学标记物并非必须是该草药生物活性的代表。

升麻属的许多不同种通常均用于治疗炎症；然而，如图10所示，其化学成分在相同分析条件下相当不同。虽然已开发不同的方法以通过使用指纹法区分升麻属种(He et al.，2006；Li et al.，2002)，但该草药化学组分的复杂性和多变性限制了上述方法在种鉴别中的应用。

因此，非常需要提取并分离升麻消旋体A以随后用作治疗剂。此外，还需要可用于鉴别升麻属成员(例如总状升麻、兴安升麻、升麻和大三叶升麻)的生物活性标记物。理想的是该生物活性标记物还可用于使升麻属种的提取物标准化以用作治疗炎症相关疾病的抗炎剂，并可用于基于每种样品的化学特征而区分种。

发明内容