[发明专利]利用STS引物鉴定人参品种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用序列标签位点(Sequence Tagged Site，STS)引物 鉴定人参品种的方法，更详细地，本发明涉及用于鉴定天丰、连丰、高丰、 金丰和仙丰5个人参品种的STS核酸标记因子的开发，还涉及基于人参的碱 基序列信息来制备STS引物、而后使用这些引物分析品种间的显性遗传从而 明确区分各人参品种的方法。

背景技术

已报道的世界人参属的植物有约12种以上，其中人参(Panax ginseng C. A.Meyer(Oriental ginseng))、西洋参(P.quinquefolium L.(American ginseng)) 和三七(P.notoginseng(Burkill)F.H.Chen(Sanchi))这3种主要作为中药材 来使用。人参在韩国、中国、日本、俄罗斯等地种植，西洋参在美国、加拿 大、中国等地种植，三七主要在中国种植，很早以前人参就被用于预防和治 疗各种疾病，最近随着人参的抗氧化作用、抗疲劳、抗癌等多种功能不断被 报道，人参的种植不仅存在于人参的主产地亚洲和北美洲，而且在欧洲和大 洋洲也在种植人参。

在韩国，人参的种植主要依靠地域传统品种紫茎人参，但是KT&G(旧 韩国人参烟草研究院)开发了体形优秀、数量或者人参皂苷含量高、抗病虫 害的天丰、连丰、高丰、金丰、仙丰等人参品种，并且这些人参的种植以最 先的农户为中心呈扩大的趋势。这些被开发的品种可以由育种专家根据地上 部分的形态特征(果实颜色、茎的颜色、出芽期等)来区别，但是不可能区 分作为主要利用部位的根，因此可能会引起由外国产原参及制品冒充国产人 参而导致的流通市场混乱、以及由人参种植时品种间混杂而导致的纯度下降 等国内外深刻的社会问题。

最近在国外，对于国家主要关心作物(黄瓜、西红柿、油菜、小麦等)， 以品种区分、稳定性检测及品种保护为目的，正在开发核酸标记因子；在韩 国也在稻子等主要作物、辣椒等蔬菜作物、菌类、牛等各种领域里进行着关 于核酸标记因子开发的研究；但是目前为止，韩国仅将依靠分子技术的蘑菇 的显性遗传认定为品种审查的法定程序DUS(distinctness，uniformity， stability)(区别性、一致性、稳定性)测试的特性项目。

作为鉴定人参品种的手段，在DNA水平上进行了开发标记物的研究， 主要利用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA， RAPD)、简单序列重复间区(inter simple sequence repeat，ISSR)、内转录间 隔区(internal transcribed spacer，ITS)等的任意的引物试图区分在韩国培育 的品种，但是这些技术在品种间区分上显示出了局限性。

本发明人报道的文献[In & Kim et al(2005)，Genetic relationships of Panax species by RAPD and IS SR analyses，Korean Journal of Medicinal Crop Science，13，249-253]中，虽然也以人参品种天丰、连丰、高丰、仙丰、金丰 和国内外收集品种紫茎人参、黄果人参、mimaki(みまき)、石柱参、竹节 参(P.japonicus)、西洋参为对象，利用RAPD和ISSR技术分析了它们之间 的遗传关系及显性遗传，但是利用这些技术区分人参品种很困难。这些技术 是利用任意引物，实验结果的重现性低，即使能寻找到种间多态性，也在遗 传信息的获得上有缺陷，因此不适合用于需要保证区别性、一致性和稳定性 的品种鉴定。