[发明专利]一种鼠疫耶尔森菌的蛋白质悬浮芯片制备及定量检测方法

权利要求书

1、一种采用蛋白质悬浮芯片技术检测鼠疫耶尔森菌的方法，其特征在于，检测过程中全部反应可在96孔滤板或者微量离心管中进行，该方法包括下列步骤：

(1)向孔加入含已包被捕获抗体编码微球的工作溶液，用清洗液清洗；

(2)加入待测样品，孵育后清洗；

(3)加入用生物素化的检测抗体，孵育后清洗；

(4)加入SA-PE，孵育后清洗；

(5)加入检测缓冲液后混匀；

(6)用悬浮芯片系统读取平均荧光强度(FMI)数值并分析数据判定检测结果。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于，用于包被微球的捕获抗体为抗鼠疫菌抗体或抗鼠疫菌F1抗原抗体(如兔抗F1Ag抗体)，采用生物素标记的检测抗体为抗鼠疫菌抗体或抗鼠疫菌F1抗原抗体(如兔抗F1Ag单抗2F6)，并且其组合组成目标检测物检测体系。

3、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的包被微球的捕获抗体兔抗F1Ag抗体用量为10μg/1.25×10⁶个编码微球或20-40ng/2500-5000个微球/测试。

4、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中的标记检测抗体兔抗F1Ag单抗2F6的生物素为羧基活性的生物素。

5、如权利要求1所述的方法，其特征在于，2mg/mL生物素化的检测抗体兔抗F1Ag单抗2F6以1:1000稀释作为检测抗体进行检测。

6、一种定量检测鼠疫菌的蛋白质悬浮芯片方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

(1)加入的阳性检测样品或标准品经梯度倍比稀释，所述梯度倍比稀释为10倍；

(2)将系列稀释样品在悬浮芯片系统中检测读取对应荧光值(MFI)；

(3)制作样品浓度对应MFI值的剂量-反应曲线；

(4)用分析软件拟合剂量-反应曲线和方程；

(5)未知浓度样品可根据剂量-反应曲线和方程判断未知样本中鼠疫菌浓度。

7、如权利要求6所述的方法，其特征在于，用于包被微球的捕获抗体为兔抗F1Ag抗体，采用生物素标记的兔抗F1Ag单抗2F6作为检测抗体，并且其组合组成目标检测物检测体系。

8、如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述定量检测鼠疫菌方法中的包被微球的捕获抗体兔抗F1Ag抗体用量为10μg/1.25×10⁶个编码微球或20-40ng/2500-5000个微球/测试。

9、如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述定量检测鼠疫菌方法中的标记检测抗体兔抗F1Ag单抗2F6的生物素为羧基活性的生物素。

10、如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述定量检测鼠疫菌方法中2mg/mL生物素化的检测抗体兔抗F1Ag单抗2F6以1:1000稀释作为检测抗体进行检测。

11、一种检测鼠疫菌的蛋白质悬浮芯片，其特征在于，所述悬浮芯片包括：编码微球，包被微球的所述鼠疫菌的捕获抗体、生物素标记的鼠疫菌检测抗体、链亲和素-藻红蛋白及所述缓冲溶液。

12、如权利要求11的蛋白质悬浮芯片，其特征在于：用于包被微球的捕获抗体为兔抗F1Ag抗体，采用生物素标记的兔抗F1Ag单抗2F6作为检测抗体，并且其组合组成目标检测物检测体系。