[发明专利]药品、保健食品和食品中PDE5型抑制剂的高效液相色谱-串联质谱联用检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱-串联质谱联用检测方法，尤其涉及药品、 保健食品和食品中PDE₅型抑制剂的高效液相色谱-串联质谱联用检测方法的新 技术。

背景技术

补肾壮阳类中成药、保健食品和食品中非法添加化学成分的行为日益猖獗， 且针对标准的高科技造假行为越来越多，严重威胁人民群众的身体健康。此类 违法活动尤以在补肾壮阳功效的中成药、保健食品和食品中非法添加PDE₅型抑 制剂(磷酸二酯酶5型抑制剂，phosphodiesterase type-5 inhibitor)最为典型活跃。 PDE₅型抑制剂是目前治疗男性性功能勃起障碍最有效的化学药品，美国食品药 品管理局(FDA)先后批准了西地那非、伐地那非和他达拉非三种PDE5型抑制 剂(详见表2)。查阅大量文献证实，壮阳类化学成分的非法添加主要以PDE₅型抑制剂为主。PDE₅型抑制剂属于处方药，临床应用时有严格的适应症、禁忌 症和一定的副作用，患者在不知情的情况下摄入容易引起严重的药物不良反应， 甚至导致死亡。近年来，还发现了添加大量上述三种PDE₅型抑制剂的未知衍生 物，这些化学成分与母体有着共同的核心结构(详见表2)，但均未经严格的安 全性实验评价其药效与毒副作用，存在着严重隐患。

中药、保健食品和食品化学成分复杂多样，各成分之间干扰严重，加上生 产工艺的影响，使得添加化学成分的检测方法要求更具专属性。当前用于检测 中成药中PDE₅型抑制剂的方法主要有理化反应、薄层层析(TLC)、近红外、 高效液相色谱-紫外/二管阵列检测器(HPLC-UV/DAD)、高效液相色谱法-质谱 (HPLC-MS)等方法。

理化反应具有操作简单、检测快速、检测试剂少且无毒、检测成本低、易 于培训掌握的优势，非常适合基层打假快速筛查可疑样品。广东省药品检验所 开发的那非类和拉非类两大理化快筛方法，可准确筛查前述十一种PDE₅型抑制 剂，推广应用可望获得了良好的经济与社会效益。薄层层析因多用有机溶剂， 且与理化反应相比优势较少，故较少使用。

近红外最大的优点在于无损、快速分析，通常检测一个样品，时间以秒计。 但近红外检测需要专业人员预先建立模板，近红外仪也需要相应的检测平台。 目前，近红外多作为药品检测车的车载技术，在打假一线现场使用。

HPLC-UV/DAD和HPLC-MS因为其出色的分离能力与高自动化水平，已 成为确证中成药中PDE5型抑制剂的主流技术。相比较而言，HPLC-UV仅依据 保留时间进行定性判别的模式，准确性不如HPLC-/DAD和HPLC-MS。

HPLC-DAD可以提供分析对象的三维光谱信息，通过与相应对照品的光谱 图比较，用于掺假化学成分的确证，基本可以排除阳性干扰。但HPLC-DAD要 求分析对象与干扰成分完全分离，这将致使分析时间延长；此外，HPLC-DAD 不能分析没有紫外吸收的化学成分，这使DAD的使用受到一定的限制。

HPLC-MS在定性上拥有无与伦比的特异性，灵敏度远远超过其它分析方法。 多数物质在合适的电离方式与条件下能电离，并依据分子键能大小断裂成，产 生与结构对应高度专属的质谱图。尤其是二级或多级质谱，即使在色谱共洗脱 的情况下仍能准确定性分析成分，这大拓展了色谱的应用范围。因此，质谱是 复杂混合物的定性的确证与仲裁方法。

上述方法各具特色，依据检测目的各有其适用范围。其中，理化、TLC、近 红外等方法检测原理基本都是针对化学成分分子结构中的某一特殊部位建立， 定性准确性有限，存在少数的假阳性干扰，因此，这些方法适合作为某类成分 的筛选方法，而不能作为确证方法使用。HPLC-UV/DAD或HPLC-MS结果准 确，但检测所需的贵重仪器决定检测只能在实验室内实施。