[发明专利]一种食用菌液体菌种静息化保存方法

说明书

技术领域

本发明属于食用菌液体菌种应用技术领域，具体涉及一种食用菌液体菌种静息化保存方法。

背景技术

食用菌液体菌种是应用发酵设备采用液体培养基发酵生产出的液体种子，应用液体菌种作为栽培种进行接菌生产可以提高食用菌的产量和质量，且易于实现食用菌的工业化和标准化生产。但食用菌液体菌种生产出来后难以保存，生产出的液体菌种必须马上应用，如果久放菌丝球继续生长和分裂，培养基中营养元素被逐渐消耗，液体菌种的质量逐渐下降，将不能继续应用于食用菌生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种适用性好，工艺简单，易于掌握的食用菌液体菌种静息化保存方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

保存的方法：首先将制备好的食用菌液体菌种离心或过滤收集菌丝球，然后将菌丝球用清洗缓冲液冲洗1-4次，冲洗后再经离心或过滤收集菌丝球，把菌丝球悬浮于静息培养基中培养6-24小时，而后将其冷藏保存；其中，所述静息培养基的成分为葡萄糖0.5％-1％，氯化钠0.2％-0.5％，硝酸铵0.05-1％，氯化钾0.05-0.15％，硫酸镁0.01％-0.5％，硫酸亚铁0.005％-0.01％，余量为水，调整PH值至6.5-7.7；所述清洗缓冲液为灭菌磷酸盐缓冲液、灭菌硼酸盐缓冲液或灭菌生理盐水。

离心收集菌丝球时离心机转速为3000r/min-8000r/min，离心时间为5-30min。所述清洗菌丝球时的清洗缓冲液为菌液体积的2-6倍；静息培养基为菌体体积的1-3倍。所述静息培养后的菌液冷藏温度为1-10℃，时间为1-6个月。过滤收集菌丝球采用灭菌纱布或灭菌尼龙网或灭菌滤纸直接过滤或抽滤。所述灭菌磷酸盐缓冲液PH为6.5-8.5，灭菌硼酸盐缓冲液PH为6.5-8.5。

本发明的优点在于：

1.本发明将食用菌液体菌种经菌丝球收集、冲洗、重悬浮等步骤处理后冷藏保存，使菌丝球保持静息化状态，既保持了液体菌种持久的活力，也延长了保存时间。

2.本发明对于常用的食用菌菌种所制作的液体菌种均有效，可利用面广，而且适用性好，工艺简单，易于掌握。

3.本发明所保存的食用菌液体菌种在接种应用时可直接使用接种枪和自动接种机进行接种，简便快捷。

4.采用本发明的保存方法，菌丝球中的菌种细胞保持静息化状态，只进行微弱的内源代谢，菌种细胞也不分裂，菌种可保持持久的活力，这样就使一次发酵制备的食用菌液体菌种能够长时间保存，改善了食用菌液体菌种的储藏条件，提高了食用菌液体菌种的利用水平。

具体实施方式

实施例1白色金针菇液体菌种静息化保存

白色金针菇液体菌种菌丝球的收集：白色金针菇液体菌种培养基组成为：玉米粉2％，麸皮2％，KH₂PO₄ 0.1％，MgSO₄ 0.05％，10ugV_B1/100ml以及50ugV_B2/100ml。发酵条件为：摇瓶装液量70ml/250ml，接种量10％，培养基起始pH为6.5，摇瓶转速200r/min，培养温度28℃，培养时间7d。

将制备好的白色金针菇液体菌种通过离心机离心收集菌丝球，离心机转速为3500r/min离心时间为20min；然后用菌丝球清洗缓冲液冲洗收集的菌丝球2次；将冲洗好的白色金针菇液体菌种菌丝球通过离心机离心重新收集，离心机转速为3500r/min离心时间为20min；将重新收集的已冲洗好的白色金针菇液体菌种菌丝球悬浮于静息培养基中培养12小时；而后将悬浮好的液体菌种菌丝球静息化体系放于4℃冰箱或冷柜中冷藏保存2-3个月。

所述清洗缓冲液：制备相当于白色金针菇液体菌种4倍体积的磷酸盐缓冲液，将其在1.05Kg/cm2压力下121℃灭菌20min；磷酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液配比(质量百分数)为：Na₂HPO₄0.24％，KH₂PO₄0.69％，PH7.5。

所述静息培养基：制备相当于白色金针菇液体菌种1.5倍体积的静息培养基，将其在1.05Kg/cm²压力下121℃灭菌20min。静息培养基成分配比为：葡萄糖0.5％-1％，氯化钠0.3％，硝酸铵0.6％，氯化钾0.15％，硫酸镁0.05％，硫酸亚铁0.01％，余量为水，调整PH值至6.8-7.4。

实施例2白灵菇液体菌种静息化保存