[发明专利]一种白花蛇舌草提取物及其分离制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物的分离，具体的说是白花蛇舌草提取物分离制备 方法，该组分主要成分是鸡矢藤苷甲酯，去乙酰基车叶草苷酸甲酯，车叶 草苷酸和车叶草苷四个化合物。

背景技术

中药白花蛇舌草为茜草科耳草属植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.又名Oldenlandia diffusa Roxb.的全草。始载于《广西中药志》，具有 清热解毒、活血化瘀、利水渗湿、消肿止痛、抗肿瘤等作用，广泛用于肿 瘤、黄疸性肝炎、肠炎和肺炎等的治疗。主产于广东、广西、福建等地。 白花蛇舌草的主要成分是环烯醚萜类、黄酮类和蒽醌类化合物，其次为有 机酸类、甾醇类化合物等。白花蛇舌草中常见的环烯醚萜类化合物主要有 鸡矢藤苷甲酯、去乙酰基车叶草苷酸甲酯、车叶草苷酸、车叶草苷和鸡矢 藤苷等。药理研究表明，白花蛇舌草具有抗氧化，消炎抗菌、抗肿瘤、免 疫调节等多种药理活性(Lin C.C.，Ng L.T.and Yang J.J.，Am.J.Chin.Med.， 2004，32：339-349；Lin C.C.，Ng L.T.，Yang J.J.and Hsu Y.F，Am.J.Chin. Med.，2002，30：225-234；赵浩如等，中国药科大学学报，2002，33(6)： 510-513；Yoshida Y.，Wang M.Q.et al.，Int.J.Immunopharmaclo.1997，19： 359-370)。同时白花蛇舌草中环烯醚萜类化合物还具有神经保护作用(Kim Y.，Park E.J.，et al.，J.Nat.Prod.，2001，64：75-78)。由于白花蛇舌草在抗肿瘤 方面的功效，越来越引起人们的关注。

白花蛇舌草及其制剂主要用于呼吸系统感染、肝炎、肺炎、肿瘤等的治 疗。环烯醚萜类化合物是白花蛇舌草中主要活性成分之一，而目前报道的 分离制备烯醚萜类化合物的方法，基本上都是采取传统的溶剂萃取、硅胶 柱层析等方法，这些方法存在重现性差、耗时长、有机残留严重、检测手 段落后、自动化程度低、无法大规模生产等缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种白花蛇舌草提取物及其分离制备方法，其中 主要成分为鸡矢藤苷甲酯、去乙酰基车叶草苷酸甲酯、车叶草苷酸和车叶 草苷四个主要的化合物。

本发明提供一种白花蛇舌草提取物，其中主要成分为鸡矢藤苷甲酯、 去乙酰基车叶草苷酸甲酯、车叶草苷酸和车叶草苷，所述的四种主要成分 总含量在60％-75％。

本发明提供的白花蛇舌草提取物，其中鸡矢藤苷甲酯的含量在 10％-15％，去乙酰基车叶草苷酸甲酯含量在10％-20％，车叶草苷酸含量 在20％-25％，车叶草苷含量在20％-25％。

本发明提供了一种白花蛇舌草提取物的分离制备方法，分为提取、醇 沉、膜分离、非极性大孔树脂分离和工业色谱分离等步骤，具体为：

1)提取：称取白花蛇舌草原药材，加入其重量6-10倍的水煎煮提取 2-3次，每次1-3小时，得到提取液，将提取液浓缩至相对密度为0.9-1.10 得浸膏；

2)醇沉：将浸膏中加入乙醇使乙醇体积浓度达到50-70％，室温静置 12-24小时，过滤，取滤液浓缩至相对密度1.05-1.10；再加入乙醇使乙醇体 积浓度达到75-80％，室温静置12-24小时过滤，取滤液浓缩挥发除去乙醇， 样品溶液经过10000-25000转/分钟的高速离心机离心；

3)膜分离：此醇沉组分再通过3000-6000Da的膜分离，得到膜分离组 分；

4)非极性大孔树脂分离：将膜分离组分上样于非极性大孔树脂柱，上 样量与分离材料体积比为1∶100-500，分别采用流动相体积浓度10-30％ 的乙醇和70-95％乙醇洗脱，每次洗脱的体积为3-5个柱体积，流速为1-3 个柱体积/小时；循环洗脱，洗脱液浓缩，即为白花蛇舌草大孔树脂分离组 分；

5)工业色谱分离：以粒径5-20微米的OEG系列硅胶键合固定相为色 谱填料，以甲醇和水为流动相，梯度洗脱，甲醇的体积浓度从2-100％变化， 收集目标组分，干燥处理即为白花蛇舌草提取物。

本发明提供的白花蛇舌草提取物的分离制备方法，所述色谱柱效为 5000-20000塔板/米。