[发明专利]促创伤愈合因子的纯化与应用

说明书

本发明涉及一种血浆来源的促创伤愈合因子(factor for supporting wound healing)的纯化和应用的方法。本发明的具体方面包括纯化和在体 内和体外保护所述分子免遭降解的方法。

背景技术

HGF是一种促创伤愈合因子，它是一种在间充质细胞(例如肺巨噬细 胞和成纤维细胞，肝中的枯否细胞，以及白细胞)中表达的蛋白。HGF是 一种细胞因子，它在细胞损伤时分泌并表现出对某些器官再生和创伤愈合 是重要的。从化学角度看，HGF是一种糖蛋白，它首先以天然(无活性) 的前体形式合成。该前体在受损器官中通过特定活化子被切割成活性 HGF。HGF和其他一些因子与肝素结合，这似乎对HGF的激活和它与其 受体的结合很重要。结合HGF的受体是c-MET。由于c-MET受体只在受 损器官中被下调，所以看来只有这些受损器官中的细胞响应于HGF-受体 相互作用。具有肝素结合亲和性的生长因子家族中这类影响创伤愈合过程 的因子的实例还包括：血小板衍生生长因子(Platelet derived growth factor，PDGF)，表皮生长因子(Epidermal growth factor，EGF)，转化 生长因子α(Transforming growth factor alpha，TGF-α)，转化生长因子 β(Transforming growth factorbeta，TGF-β)，胰岛素样生长因子(Insulin like growth factor，IGF-I)和成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor，FGF)。

抗凝血酶III(AT-III)是一种血浆糖蛋白，它可以抑制凝血级联过 程中丝氨酸蛋白酶，因此，在凝血调控中起重要作用。AT-III是因子IXa、 Xa、XI、XIIa和凝血酶的抑制剂。因此，AT-III在凝血级联的不同阶 段调控凝块的形成。血液中AT-III含量的轻微减少与血栓栓塞风险的增 加相关。AT-III浓缩物被用于在获得性或遗传性AT-III缺乏患者中预防 和治疗血栓栓塞疾病。另外，已有报道表明AT-III还参与许多其它生物 学反应，例如血管发生和炎症反应。但AT-III在这些机制中的作用尚未 完全弄清。

以肝素作为固定相结合配基，采用亲和色谱纯化AT-III的方法是本 领域已知的。Miller-Andersson等(Thrombosis Research 5，439-452， 1974)发表了使用肝素-琼脂糖凝胶纯化人AT-III的方法。包括离子交 换和凝胶过滤色谱法的整个过程提供34％的得率。

富含组氨酸的糖蛋白(Histidine-rich glycoprotein，HRGP)是一种 单链血浆蛋白，最早于1972分离得到。HRGP确切的生理功能仍旧未 知。由于它与肝素、纤维蛋白原和纤维蛋白、纤溶酶原和活化血小板的 相互作用，HRGP被认为是凝血和纤溶的调节因子(Koide，T.In： Fibrinolysis：Current Prospects.Gaffney，PJ(Ed.)，John Libbey & Co.， London 1988，p.55-63)。该多肽链由507个氨基酸残基组成，其包含与 其他血浆蛋白(如AT-III)同源的区域(Koide，T.et al.(1986) Biochemistry 25，2220-2225)。

发明内容