[发明专利]一种从林蛙组织中萃取胶原螺旋肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及到用林蛙体萃取胶原旋肽的制备方法。

背景技术

林蛙以其特有的营养价值和药用价值，而日渐被人们所重视，成为蛙类中经济价值较高的一种。又因其专摄取昆虫类食物，又被誉为“纯绿色食品”。林蛙是延缓衰老、滋补强壮、美容健肤、增强机体免疫力的最佳进补良药。目前林蛙人工养殖数量日益增多，科学加工林蛙已是相关科研单位研究的主要课题。经研究表明源自两栖动物的肽，具有螺旋肽两亲性结构，与细胞膜的肌肤有高亲和性。它们在蛙类的两栖动物的肌健、骨膜、皮肤腺体中形成生物防护素，即胶原螺旋肽。本发明是从林蛙体中萃取胶原螺旋肽的方法，为林蛙药用保健价值提供新的空间。

发明内容

本发明的目的是提供从林蛙体中萃取胶原螺旋肽的制备方法，使林蛙体生物活性物质得到更广泛的应用，为人们能在日常生活中获得林蛙的营养、药用、美容价值的保健食品提供方便，也为林蛙产业发展起到促进作用。

一种从林蛙组织中萃取胶原螺旋肽的制备方法

1.林蛙体的获取：

1.1林蛙体的选择：在秋季捕捉林蛙，经干制法被剥取林蛙油后的雌性林蛙和雄性林蛙体，或经鲜活制法剥取蛙油后的新鲜雌性蛙体，或鲜活的雄性林蛙体为原料。

1.2林蛙体的贮存：A、收集干制的雄蛙干或取油后的雌蛙干，贮于0-4℃冷藏库内；B、收集鲜活雄蛙或被剥取蛙油的雌蛙，速冻后贮存于-18℃的冷冻库内备用；

2、林蛙体的预处理：

2.1取干制的林蛙体，用中药切片机切成1.0-5.0mm的蛙体片，然后将蛙体片置于不锈钢槽内，加入1-5倍蛙体重量的蒸馏水或纯净水，同时加入1-3％蛙体重量的柠檬酸钠、酒石酸或V_C，浸泡4-10小时，水温控制在20-40℃之内，每隔20-60min搅拌一次；

2.2取冷冻贮存的蛙体，采用电动刨肉机，将蛙体均匀的刨成1.0-5.0mm的薄片，然后置于不锈钢槽内，加入1-3倍蛙体重量的蒸馏水或纯净水，同时加入1-3％蛙体重量的柠檬酸钠、酒石酸或V_C，浸泡2-6小时，每隔20-60min搅拌一次，水温控制在10-20℃；

3、生物酶解：

3.1复合酶解：将预处理后的林蛙片连同浸泡汁，加入真空反应釜内，加热至35-60℃，调整PH值为6-8，每千克林蛙体加入2-6g的1398中性蛋白酶，1-3g的1203脂肪酶，1-5g防腐剂乳酸菌素或氟硅酸钠，每100万单位酶活量加入2-8g亚硫酸钠或V_C作为酶激活剂；真空度控制在100-800Pa，搅拌下酶解反应6-12h；然后用100-300目的双联过滤器过滤出骨渣等杂物；在复合酶解反应下，有脱脂反应过程和酶解蛋白质过程；得复合酶解液；

3.2生物酶修饰：经酶降解液体含有蛋白酶与肽酶复合体，味比较苦，为修饰苦味和彻底酶解，将复合酶解液用空气压力输送至生物酶修饰反应釜中，调整PH值为6～8，温度控制在40～60℃，加入蛙体质量0.2～2.0％的丹麦诺维信功能食品工业生产的Flavourzyme复合风味蛋白酶、0.1～1.0％的磷脂酯酰基水解酶(俗称：磷脂酶A)，真空度为200～800Pa搅拌酶修饰3～8h；通过酶修饰成黏度3/mpa.s6～12、产率16～36％的胶原螺旋肽分子液；

3.3灭酶，采用超高温瞬间灭酶法在120-150℃/s，出料温度为30-50℃的条件下灭酶，或加温60-80℃/30-60min使酶失活；

4、胶原螺旋肽分离纯化

4.1离心分离：采用高速离心机将酶解液以6000-60000r/min的速度离心6-20min，将上层液和中层液合并输入稀释罐体内，即酶解分离液，下层液被分离出去；

4.2稀释：将酶解分离液，按1∶1-3重量比例加入纯净水或蒸馏水，在真空度100-800Pa搅拌稀释；

4.3超微膜纯化：将稀释液用循环泵加压0.2MPa-0.8MPa通过平衡保险分离器在0.1um-0.5um的精度下进行分离，然后用5-50m³/h的循环泵将滤液在0.6-1.6MPa的压力下通过50000道尔顿的超微膜纯化，获得分子量大于等于50000道尔顿的胶原螺旋肽液；

4.4低温浓缩：为保持胶原螺旋肽活性，不被高温破坏螺旋肽活性成份，采用热隔膜低温浓缩技术对胶原螺旋肽液进行浓缩，温度为40-60℃，真空度为0.3-1.8MPa，除去胶原螺旋肽液中30-70％体积的水分，然后将浓缩液输送到平衡罐内；

5、干燥成型：