[发明专利]用于防止血小板粘附的蛋白

说明书

发明概述

本发明描述了一种从药用水蛭(-)医用水蛭(Hirudomedicinalis)唾液中分离的天然蛋白，这种蛋白可与胶原蛋白强烈结合，从而可作为与胶原蛋白粘附的血小板的抑制剂。此蛋白的分子量约为12000，具有酸性等电点，并且含有六个半胱氨酸。对此蛋白进行了测序，并且从医用水蛭的cDNA文库中克隆到了它的基因。通过重组技术制备这种蛋白的方法已经公开。此重组体和天然蛋白是胶原蛋白依赖性血小板粘附的有效抑制剂，因此对于治疗循环系统疾病和与顽固疾病相关的病况的治疗很有效。进一步，此蛋白可有效的包被天然或人工胶原蛋白的表面，从而防止细胞粘附和细胞的活化。

发明领域

在止血法或血栓形成中，血小板结合到受伤血管的细胞外基质上，并且覆盖住受损伤的区域。这是血栓症和动脉阻塞的发病机理中重要的起始步骤，防止此步骤就可在防止血栓症的努力中取得治疗上的收益。胶原质被认为是凝血酶原表面组分中最多的，已经证明它是血小板粘附、聚合及其颗粒释放的强刺激物，这些颗粒的释放可导致额外的血小板补充到这一区域来形成聚合体或血栓(Ruggeri，Z.M.etal.；Seminars in Hematology，1994，31，229-39)。血小板与血管表面的起始接触是由结合到弱Willebrand因子(vWF)上的胶原质和血小板上的特异vWF以及糖蛋白Ib-V-IX复合体介导的。此外，在凝血酶活性增加持续促进交联的纤维蛋白凝块形成的同时，ADP、肾上腺素和循环凝固因子推动血小板粘附的进一步活化。血小板-血小板聚集支持了这一过程，并且主要由纤维蛋白酶原驱动，纤维蛋白酶原是通过糖蛋白IIb/IIa受体桥接细胞的介质。

在血小板粘附到暴露于巩膜损伤(Van der Rest M.etal.；FASEBJournal，1991，5，2814-23)中的胶原质并且进一步开始形成阻塞的生理过程中，这一正常的的生理反应是相当重要的。依赖于隐藏位点及其程度，严重的并发症如心肌梗塞、中风、炎症或肺部栓塞可造成严重的后果。

肝素是一种可直接作用的抗血栓形成的药剂，它可阻断凝血酶的活性从而防止富纤维蛋白血栓症的形成，因而肝素是现今用于抗血栓的最著名的药物。肝素的广泛应用表明有如：不稳定的咽痛和急性心肌梗塞。然而，尽管它有如此广泛的应用，它仍有一些缺点，如静脉内应用、要求抗凝血酶III作为协同因子、由与凝块相结合的凝血酶引起的亲和性降低、几种质膜蛋白引起的失活、偶然诱导的血小板减少以及其生物异质性仍然有待解决。因而肝素在临床应用上至今仍没有取得压倒性的结果。

最近低分子量肝素的发展有助于可用于皮下应用的药剂，然而其治疗效果与标准肝素相比提高不大。不幸的是它同样作用于那些直接作用的抗凝血酶如水蛭素、Hirulog及苄丙酮香豆素。这表明一个主要问题可能与在应用抗血栓治疗的情况下凝血酶的产量增加有关(Rao，A.D et al.，Circulation，1996，94，389-2395)。

因此最近针对它的策略聚焦在凝血素活化的过程上，而此活化是由Xa因子推动的。主要的问题是设计直接作用于此因子的适当抑制剂。因此，本发明的发明总结认为人们并没有意识到这种类型的发明的全部治疗潜力。

另一系列的治疗法是以溶解血栓的养生法为代表，其焦点集中在开发葡萄球菌激酶、链激酶、尿激酶型血纤维蛋白溶酶原激活剂、组织型血纤维蛋白溶酶原激活剂及anisoylated-血纤维蛋白溶酶原-链激酶激活剂复合体。对每一种溶解血栓的药剂来讲，在诱导重灌注上有显著不同，然而在降低整体的死亡率上效果是相同的。此外，血栓重阻塞和延长的流血是常见的并发症。这可归因于其对纤维蛋白相对较低的特异性以及这些化合物的短质膜半衰期。现今为了克服溶解血栓的治疗中的缺陷，已经检测了多种养生法的应用及不同血溶蛋白溶解原理的结合应用。然而期望得到的改进却相当微小。

最近出现了一组新病人，它们的问题为如急性血栓阻塞以及归因于一些技术如血管成形术、动脉粥样硬化斑切除术、动脉嫁接或血管壁斯滕特印模等技术的晚期再狭窄。可能的介入治疗包括抗血小板、抗血栓及血栓溶解策略。其它多种药剂如盐酸氯苄吡啶可用做ADP拮抗剂或钙离子载体A-23187、另外阿司匹林可直接影响血小板的功能，因而已经建议将其用于或已经用于防止或减少血小板聚合。按照本发明，新的抗血小板粘附物质当用于外科手术时也可有助于克服那些临床上的并发症。