本发明公开了一种兼具靶向性和荧光特性的pH敏感壳聚糖载药胶束及其制备方法，以具有pH敏感性的两亲性壳聚糖为载药胶束，以聚乙二醇为连接臂，分别在其两端接枝叶酸和荧光染料噻唑橙，从而构建得到一种集靶向性、pH敏感性、隐形性和荧光示踪于一体的多功能壳聚糖载药胶束。本发明的壳聚糖载药胶束具有良好的荧光性能，且其对抗癌药5‑氟尿嘧啶具有良好的载药性能，载药效率可达42.76％；在生理环境pH值(pH＝7.4)条件下，8h内累积释放药量仅为2％，26h累积释药量不足8％，可减少壳聚糖载药胶束在输运抗癌药5‑氟尿嘧啶对正常组织细胞的毒副作用。同时，在肿瘤细胞溶酶体pH值(pH＝4.5)条件下，表现出良好的pH敏感释药性能，5‑氟尿嘧啶的释放量在4h时达到95％。
1.一种兼具靶向性和荧光特性的pH敏感壳聚糖载药胶束的制备方法，其特征在于，以具有pH敏感性的两亲性壳聚糖OCCC为载药胶束，以聚乙二醇为连接臂，分别通过缩合反应在其两端接枝叶酸和荧光染料噻唑橙，从而构建得到一种集靶向性、pH敏感性、隐形性和荧光示踪于一体的多功能壳聚糖载药胶束，制备方法包括以下步骤：(1)N‑辛基‑N’‑(2‑羧基环己甲酰基)壳聚糖的合成称取1质量份的壳聚糖CTS，并将其置于无水甲醇中，在30℃和机械搅条件下进行溶胀；而后向反应液中缓慢滴加2.07‑2.48质量份的辛醛，保温反应5‑36h后，分六个批次加入硼氢化钠0.5‑1质量份的NaBH4，室温下继续还原12‑36h，还原反应完成后调节反应液pH值至6‑8；反应液抽滤，并用甲醇和去离子水交替洗涤滤饼，而后滤饼经真空干燥后得到淡黄色的N‑辛基壳聚糖OC；称取1质量份的上述N‑辛基壳聚糖OC并将其置于反应瓶中，采用无水二甲基亚砜DMSO进行溶胀，在室温条件下向反应瓶中滴加1‑2质量份的六氢苯酐C8H10O3，升温至80℃反应12‑36h；反应结束后，将反应液倒入去离子水中并置于冰水浴中，并调节反应液pH值至9‑10；反应液进行抽滤，将滤液置于分子量为3500的透析袋中进行透析，而后将透析袋中反应液经冷冻干燥即可得黄白色絮状固体N‑辛基‑N’‑(2‑羧基环己甲酰基)壳聚糖OCCC；(2)聚乙二醇的叶酸接枝物FA‑PEG‑NH2及噻唑橙接枝物TO‑PEG‑NH2的合成以二甲基亚砜为溶剂，称取1质量份的叶酸FA，并以1.38‑1.72质量份的N‑羟基琥珀酰亚胺NHS和0.34‑0.68质量份的二环己基碳二亚胺DCC为缩合剂，在室温下避光搅拌4h，而后向反应体系中加入3.45‑6.90质量份的端氨基聚乙二醇NH2‑PEG‑NH2，继续搅拌反应8‑12h；反应结束后向体系加入去离子水，抽滤除去不溶物，所得滤液离心后进行冷冻干燥；冷冻干燥所得固体产物在氯仿中溶解并进行抽滤，滤液用乙醚进行重结晶，过滤所得析出物再次溶于去离子水中，并再次经冷冻干燥得橘黄色海绵状产物，即聚乙二醇的叶酸接枝物FA‑PEG‑NH2；采用同样的合成方法，将上述叶酸FA换成1.38质量份的荧光染料噻唑橙TO，其它反应条件不变，可得红色海绵状固体，即聚乙二醇的噻唑橙接枝物TO‑PEG‑NH2；(3)聚乙二醇的丁二酸酐SA接枝物的合成称取1质量份的步骤(2)中所制备的FA‑PEG‑NH2并将其溶于无水二甲基亚砜DMSO中，加入0.2‑0.3质量份的丁二酸酐SA，室温下搅拌反应，反应结束后向反应液加入0.75‑1.5质量份的氯仿，并将反应液滴入冷乙醚中析出桔色不溶物；反应液抽滤，滤饼采用丙酮进行反复洗涤去除残留溶剂及未反应的丁二酸酐，而后将滤饼溶于水并经冷冻干燥得淡黄色海绵状固体，即SA‑PEG‑FA；称取1质量份的步骤(2)中所制备的TO‑PEG‑NH2并将其溶于无水二甲基亚砜DMSO中，加入0.2‑0.3质量份的丁二酸酐SA，室温下搅拌反应，反应结束后，反应液经旋蒸浓缩后逐滴滴入冷乙醚中，析出红色不溶物，过滤除去溶剂，滤饼用去离子水进行洗涤除去未反应的丁二酸酐，而后将滤液置于分子量为2000的透析袋中进行透析，而将透析袋中反应液后经冷冻干燥得浅红色海绵状固体，即SA‑PEG‑TO；(4)兼具靶向性和荧光特性的pH敏感壳聚糖载药胶束FA‑PEG‑OCCC‑PEG‑TO的合成称取1质量份的步骤(3)中所制备的SA‑PEG‑FA和1质量份的步骤(3)中所制备的SA‑PEG‑TO，并将它们在无水二甲基亚砜DMSO中进行溶胀，而后以0.3‑0.6质量份的DCC和0.2‑0.4质量份的NHS为缩合剂，室温下避光搅拌3‑5h；而后向反应液中加入1‑2质量份的步骤(1)中所制备的OCCC反应24h；反应结束后，向体系中加入蒸馏水，过滤除去不溶物，所得滤液置于分子量为3500的透析袋中进行透析，而后透析袋中的反应液经冷冻干燥得橘红色海绵状产物，即兼具靶向性和荧光特性的pH敏感壳聚糖载药胶束FA‑PEG‑OCCC‑PEG‑TO。
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