本发明涉及一种通用无标记LIC载体pMF‑LIC及其构建方法与应用,其是以质粒pJG100为模板,以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2为引物对进行PCR扩增,得到目的片段LIC序列;将目的片段LIC序列用限制性内切酶Xba I和Sac I双酶切,再与经同样双酶切的pMF‑Npt II质粒连接,获得通用无标记LIC载体pMF‑LIC。本发明提供的pMF‑LIC载体使用安全,除引入目的基因外不含任何载体的骨架序列;简便,外源待克隆PCR片段不需要酶切和连接反应;高效,不依赖连接酶,很大程度简化了DNA重组过程,且完全靠粘性末端配对退火