本发明公开了一种提高热稳定、扩增均一性和扩增效率的Phi29DNA聚合酶突变体及其应用,突变体由SEQ ID NO.1所示的Phi29DNA聚合酶中氨基酸突变形成,具体氨基酸突变方式为:M97D,G197A本发明的Phi29DNA聚合酶突变体具有9个突变位点,可长期存放于室温条件,与野生型相比,该突变体在DNA扩增反应中具有弱偏好性和更高的反应速率。本发明的Phi29DNA聚合酶突变体作为DNA聚合酶在DNA扩增中的应用,可以催化多重置换扩增,催化滚环复制反应;制备用于DNA测序或RNA测序的试剂盒。
本发明公开了单细胞基因组扩增酶(phi29DNA聚合酶)的突变体及其应用。该蛋白质是对phi29DNA聚合酶进行突变得到的蛋白质,所述phi29DNA聚合酶的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示,所述突变为所述phi29DNA聚合酶的第136位的苯丙氨酸突变为半胱氨酸和第通过将phi29DNA聚合酶的第136位的F突变为C和第376位的A突变为C形成二硫键,提高了phi29DNA聚合酶的扩增能力。