本发明公开了一种腈水合酶突变体、菌株及在催化芳香族腈类化合物合成酰胺类化合物中的应用,所述腈水合酶PfNH突变体是将SEQ ID NO.9所示腈水合酶PfNH氨基酸序列的第86位进行单突变获得的。本发明腈水合酶PfNH突变体PfNH‑Q86W的底物偏好性发生明显改变,对分子量较大的芳香族腈类如4‑氰基吡啶、苯甲腈、2,6‑二氟苯甲腈的催化性能较野生型显著的提升,对比酶活分别提高2.56倍、9.35倍、2.29倍;而对分子量较小的脂肪族腈类如异丁腈、正戊腈的催化性能较野生型有所降低,比酶活分别是野生型的0.38倍、0.80倍。突变体对芳香族腈类化合物催化活性显著提高,展现出工业应用前景。