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[发明专利]TAT核心肽段在制备高效、可溶性表达的外源蛋白中的应用-CN201410067808.1在审
发明人：张成岗;吴永红;高艳 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所
申请日： 2010-03-08 - 公布日： 2014-06-18 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明TAT核心肽段在制备高效、可溶性表达的外源蛋白中的应用，公开了一种利用TAT核心肽段促进原核表达体系高效、可溶性表达外源蛋白的方法及其专用表达载体。通过本发明的实施，不仅可以获得可溶性的外源蛋白，而且还可以获得高产量的外源蛋白，为大量制备具有生物活性的外源蛋白奠定基础和提供关键技术，解决了生物工程和药物研发等领域外源蛋白难以高效表达的难题，从而可显著节约后续进行外源蛋白分离纯化的成本
tat 核心制备高效可溶性表达蛋白中的应用

[发明专利]一种高效表达外源蛋白的CHO细胞株的构建方法、构建的CHO细胞株及其应用-CN201811519425.8在审
发明人：田克恭;谭菲菲;孙进忠;张许科 -专利权人：普莱柯生物工程股份有限公司
申请日： 2018-12-12 - 公布日： 2020-06-19 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供了一种高效表达外源蛋白的CHO细胞构建方法，其中，该方法包括：克隆、重组一系列外源蛋白基因的表达质粒，该表达质粒分别逐一包含前置的13种信号肽及该外源蛋白基因；转染CHO细胞，根据表达量筛选出该外源蛋白表达量最高的前置信号肽序列，构建该信号肽序列和外源蛋白基因的表达质粒，然后转染CHO细胞，逐步筛选稳定表达外源蛋白的单克隆细胞。本发明还涉及该方法构建的高效表达外源蛋白的CHO细胞和使用该细胞表达外源蛋白的方法。本发明的方法能较常规表达显著提高蛋白表达含量，且可应用于多种外源蛋白的表达，无需对外源蛋白的基因进行优化，具有广泛的适用范围。
一种高效表达蛋白 cho 细胞株构建方法及其应用

[发明专利]一种利用杆状病毒表达外源蛋白的方法及其应用-CN201710633480.9有效
发明人：田克恭;张海洋;孙进忠;张许科 -专利权人：普莱柯生物工程股份有限公司
申请日： 2017-07-28 - 公布日： 2022-07-15 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种杆状病毒高效表达外源蛋白的方法的方法，该方法通过在病毒吸附后使用D‑氨基葡萄糖细胞孵育细胞，能显著提高外源蛋白的表达量，表达量能提高一倍。该方法适应性广，能针对多种外源蛋白进行高效表达。
一种利用杆状病毒表达蛋白方法及其应用

[发明专利]一种在杆状病毒表达系统中高效表达外源蛋白的方法及其应用-CN201811151129.7在审
发明人：田克恭;王同燕;孙进忠;张许科 -专利权人：普莱柯生物工程股份有限公司;洛阳惠中生物技术有限公司
申请日： 2018-09-29 - 公布日： 2020-04-07 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供了一种在杆状病毒表达系统中高效表达外源蛋白的方法，该方法通过在pFastbac Dual质粒中p10启动子和多角体启动子之后分别克隆外源蛋白基因，同时在p10启动子和多角体启动子之间插入同源重复序列，使得表达的外源蛋白量大大增加，表达的外源蛋白保持了其原有的免疫原性。本发明的表达外源蛋白的方法高效，低成本，能用于大量制备疫苗。
一种杆状病毒表达系统高效蛋白方法及其应用

[发明专利]介导外源基因在哺乳动物细胞高效表达的载体及其应用-CN201110164439.4有效
发明人：李世崇;陈昭烈;叶玲玲;刘红;刘兴茂;何文俊;王启伟 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所
申请日： 2011-06-17 - 公布日： 2011-11-23 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了介导外源基因在哺乳动物细胞高效表达的组合载体，该组合载体包括外源基因高效表达载体pATEW和人工转录因子表达载体pcDNA3.1(+)/Hy/GVP4。外源基因高效表达载体pATEW组合了人β-globin MAR序列、hEF-1α基因转录调控序列、转录后调控元件WPRE等基因表达调控元件和人工转录因子结合位点序列；人工转录因子表达载体pcDNA3.1(+)/Hy/GVP4表达由VP16中12肽(DALDDFDLDMLG)的4个串联重复作为人工转录因子的功能结构域和SV40的核定位序列两部分连接而成的人工转录因子GVP4。将携带外源基因的pATEW和pcDNA3.1(+)/Hy/GVP4共转染哺乳动物细胞，即可实现外源基因在哺乳动物细胞中的高效表达。
介导外源基因哺乳动物细胞高效表达载体及其应用

[发明专利]猪源启动子蛋白表达载体及其构建方法与应用-CN201010261045.6有效
发明人：崔尚金;刘芹防;刘珊珊;张超范 -专利权人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
申请日： 2010-08-24 - 公布日： 2011-01-19 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了猪源启动子蛋白表达载体及其构建方法与应用。本发明表达载体为环状，包含原核复制起点、真核复制起点、筛选标记基因和外源基因表达盒，所述外源基因表达盒自上游至下游依次由转录启动子、连接片段和多聚腺苷酸加尾信号组成；所述转录启动子是MLP6启动子。本发明表达载体可在猪类细胞中高效表达外源蛋白，因含有一个真核复制起点，可在表达T抗原的细胞中大量增值，从而提高蛋白表达水平。本发明利用同源重组构建表达外源基因的重组载体，避免了传统的酶切，连接等环节，比传统的连接过程省略了2-3个步骤。使用本发明载体构建表达外源基因的重组载体的过程简便、快速、经济、高效，可以快速完成大量外源基因的表达载体的构建。
启动子蛋白表达载体及其构建方法应用

[发明专利]胰岛素稳定表达质粒的构建及其在体内的高效导入方法-CN02111596.6无效
发明人：卢大儒;贺晨霞;吴文君 -专利权人：上海复旦深慧基因科技有限责任公司
申请日： 2002-04-29 - 公布日： 2002-11-27 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：尾静脉大容量快速注射可介导外源基因高效转染动物肝脏,达到外源基因在体内的高水平表达,但该方法缺点为表达时间短暂。转座子存在时外源基因可整合到细胞基因组上,从而外源基因可长期表达。ApoE基因区的肝位置控制区序列(HCR)与外源基因表达单位相连,可介导外源基因的高效长期表达。线状DNA通过尾静脉注射进入肝脏后可延长外源基因在体内的表达时间。本发明将不同的胰岛素表达基因构建到转座子载体和HCR特异表达载体上后,通过尾静脉大容量快速法注射到小鼠体内,达到血糖下降并长期稳定的效果。
胰岛素稳定表达质粒构建及其体内高效导入方法

[发明专利]用标记基因预测外源基因表达量及筛选转基因生物的方法-CN201410678673.2在审
发明人：钟伯雄;叶露鹏;钱秋杰;张玉玉;尤征英;王少华;车佳倩;宋佳 -专利权人：浙江大学
申请日： 2014-11-24 - 公布日： 2015-03-11 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明公开了一种用标记基因预测外源基因表达量及筛选转基因生物的方法。采用分子生物学技术构建包含有标记基因和外源基因两个相邻且转录方向相同的表达框的转基因表达质粒；采用显微注射法将转基因质粒与辅助质粒一起导入到生物的基因组内，培育成外源基因能够稳定遗传和表达的转基因生物；根据转基因生物中标记基因表达量的信息预测外源基因表达量，并筛选获得该外源基因表达量对应的生物个体或品种。本发明可简单、快捷、省力地从大量的转基因生物中筛选出高效表达外源基因的转基因生物个体或品种，为建立高效的生物反应器提供了理想的筛选手段。
标记基因预测表达筛选转基因生物方法

[发明专利]一种高效表达外源蛋白的谷氨酸棒杆菌诱变菌株及应用-CN202010859729.X有效
发明人：孟丽虹;刘秀霞;白仲虎 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-08-24 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供了一种高效表达外源蛋白的谷氨酸棒杆菌诱变菌株，其能解决现有谷氨酸棒杆菌作为外源蛋白表达宿主时，蛋白表达量低的技术问题。一种高效表达外源蛋白的谷氨酸棒杆菌诱变菌株，其特征在于：该谷氨酸棒杆菌诱变菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20138。本发明的谷氨酸棒杆菌诱变菌株，经外源蛋白表达验证，与出发菌株进行对比，胞内蛋白的表达量、分泌蛋白的表达量均得到显著增强。
一种高效表达蛋白谷氨酸杆菌诱变菌株应用

[发明专利]一种在大肠杆菌表达系统中高效表达外源蛋白的方法及其应用-CN202010096475.0有效
发明人：田克恭;李鹏昊;张许科 -专利权人：普莱柯生物工程股份有限公司
申请日： 2020-02-17 - 公布日： 2023-10-17 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效表达外源蛋白的大肠杆菌构建方法及其应用，其中，所述方法包括：步骤(1)BL21(DE3)lpxM基因的敲除；步骤(2)将tig基因插入步骤(1)得到的BL21(DE3)lpxM基因缺失株；(3)重组载体pET28a‑Rcodon的构建；(4)外源蛋白基因克隆至步骤(3)得到的重组载体pET28a‑Rcodon；(5)将步骤(4)所得重组载体转化步骤(2)得到的菌株；以及步骤(6)外源蛋白的收获本发明方法使得外源蛋白高效表达，能较大肠杆菌常规表达显著提高外源蛋白的表达量，内毒素含量大大降低，且本发明方法可应用到多种外源蛋白的高效表达，可广泛适用于真核生物来源的蛋白在内的多种兽医疫苗蛋白，具有广泛的适用范围
一种大肠杆菌表达系统高效蛋白方法及其应用

[发明专利]一种诱导外源基因在革兰氏阴性菌中表达的系统及其应用-CN201610171174.3有效
发明人：陈国强;赵晗;张浩千;兰陆红 -专利权人：清华大学;蓝晶（北京）生物科技有限责任公司
申请日： 2016-03-23 - 公布日： 2018-06-22 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种诱导外源基因在革兰氏阴性菌中表达的系统及其应用。本发明提供了一种在革兰氏阴性菌中表达外源基因的方法，为为用含有阻遏蛋白表达盒和RNA聚合酶表达盒的调控元件调控外源基因表达盒在革兰氏阴性菌中表达；本发明的实验证明，本发明提供革兰氏阴性菌中高效诱导表达系统由特定聚合酶和其对应的启动子两部分构成，在革兰氏阴性菌中诱导表达聚合酶、启动子和驱动的外源基因，可实现外源基因的高效大量表达，实现工业生产中具备简化提取步骤、提高蛋白表达量、降低生产成本的重要意义，具有广泛的应用前景，具有广阔的商业利用价值
革兰氏阴性菌诱导外源基因外源基因表达盒聚合酶启动子外源基因表达盒表达外源基因应用蛋白表达量表达系统调控元件高效诱导商业利用诱导表达重要意义阻遏蛋白驱动调控

[发明专利]高通量筛选高效表达外源蛋白的重组里氏木霉的方法-CN201210271826.2有效
发明人：董志扬;秦丽娜 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2012-08-01 - 公布日： 2013-01-16 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开了高通量筛选高效表达外源蛋白的重组里氏木霉的方法。该高通量筛选高效表达外源蛋白的重组里氏木霉的方法包括如下步骤：比较经流式细胞仪鉴定的表达外源蛋白的重组里氏木霉的红色荧光强度，根据红色荧光强度的高低鉴定外源蛋白的表达能力，红色荧光强度越高的表达外源蛋白的重组里氏木霉的外源蛋白表达能力越高其中的外源蛋白基因以融合基因的形式导入里氏木霉，该融合基因是将红色荧光蛋白基因通过连接肽2A序列与外源蛋白基因连接得到的融合基因，所述外源蛋白基因位于所述红色荧光蛋白基因的上游或下游；所述外源蛋白基因的
通量筛选高效表达蛋白重组里氏方法

[发明专利]一种运载蛋白、重组表达载体、外泌体及制备方法与应用-CN201811023079.4在审
发明人：谢秋玲;熊盛;王凯;季煜华 -专利权人：暨南大学
申请日： 2018-09-04 - 公布日： 2019-02-01 - 主分类号： C07K14/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种运载蛋白、重组表达载体、外泌体及制备方法与应用。所述的运载蛋白可以通过与外源目的蛋白融合，高效地携带外源目的蛋白进入外泌体中。本发明还提供了一种重组表达载体，可将待表达的外源蛋白肽段基因序列插入至所述的重组表达载体的多克隆位点上，实现高效、定向地使外源蛋白在细胞的外泌体中表达。同时，本发明还提供了一种携带外源蛋白的外泌体的制备方法，可有效地将外源目的基因带入外泌体中，操作简单易行，工艺稳定，适用性好。通过所述的制备方法制得的外泌体含有外源目的蛋白，并具有很好的细胞通透性，转染细胞的效率高，同时可发挥外源目的蛋白的活性与功效，具有广阔的应用前景。
重组表达载体目的蛋白外源制备外源蛋白运载蛋白应用外源目的基因多克隆位点细胞通透性工艺稳定基因序列转染细胞携带有效地肽段细胞融合

[发明专利]蛋白真核表达启动子与蛋白表达载体及其构建方法与应用-CN201910749622.7有效
发明人：马婧姣;谢立香;严亚贤;孙建和 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2019-08-14 - 公布日： 2021-11-12 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明涉及蛋白真核表达启动子与蛋白表达载体及其构建方法与应用。蛋白表达载体是一种环状载体，包含原核复制起点、一个真核复制起点、筛选标记基因和外源基因表达盒，所述外源基因表达盒自上游至下游依次由蛋白真核表达启动子、连接片段和多聚腺苷酸加尾信号组成，所述连接片段含有AfeI与现有技术相比，本发明的蛋白表达载体利用蛋白真核表达启动子驱动外源基因表达，该载体含有的启动子元件在禽源与人源细胞中均具有高效的蛋白表达效率，而且本载体的构建过程简便、快速、经济、高效。本发明的蛋白表达载体具有很好的应用前景。
蛋白表达启动子载体及其构建方法应用

[发明专利]携带双筛选基因的真核表达载体构建及其应用-CN201110283158.0无效
发明人：董小岩;田文洪;吴小兵;董哲岳 -专利权人：北京五加和分子医学研究所有限公司
申请日： 2011-09-22 - 公布日： 2013-04-03 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明具体涉及一种携带dhfr和neo基因的真核表达载体pAAV2neo-dhfr，该表达载体主要由AAV2的ITR、neo基因表达框、dhfr基因表达框和外源基因表达框组成，其中外源基因表达框中含有多克隆位点MCS，用于表达外源基因的插入。使用时将外源基因插入其表达框的多克隆位点之间，获得外源基因的表达载体，转染表达细胞，多种策略筛选获得外源基因的稳定高表达细胞株。由于该载体携带AAV2的ITR序列，因此有利于外源基因稳定表达细胞株的获得。同时，该载体包含两种筛选基因，适用于多种表达细胞并缩短稳定高表达细胞株的筛选过程。本载体可高效地真核表达多种外源基因，为真核蛋白的表达提供了新的选择。
携带筛选基因表达载体构建及其应用

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