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[发明专利]用于绵羊肺炎支原体毒力比较分析方法-CN201910833470.9有效
发明人：郝华芳;储岳峰;陈胜利;颜新敏;袁婷;刘永生 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-09-04 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明比较分析绵羊支原体菌株毒力的方法是将经复苏的各待比较分析的绵羊支原体分别接种于不同鸡胚上，再将接种后的鸡胚置于恒温箱内培养，定时检测鸡胚状态及死亡情况，统计各个菌株的鸡胚致死率和接种7d死亡率，结合死亡鸡胚尿囊液绵羊肺炎支原体的鉴定结果本发明的方法成本低、实验动物SPF鸡胚容易获得、操作简单方便、试验周期短、重复性好等优点，克服了现有技术存在的实验动物价格较为昂贵、对实验动物要求高，动物饲养繁琐、试验周期长、重复性较差等缺点。
用于绵羊肺炎支原体毒力比较分析方法

[发明专利]一种无血清绵羊肺炎支原体抗原的制备方法-CN201910832513.1在审
发明人：郝华芳;储岳峰;陈胜利;颜新敏 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-09-04 - 公布日： 2019-11-15 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供一种无血清绵羊肺炎支原体抗原的制备方法，步骤如下：(1)鸡胚准备：准备7‑8日龄的健康SPF鸡胚，鸡胚活力旺盛、血管清晰，孵化箱培养；(2)绵羊肺炎支原体接种液准备；(3)鸡胚接种、培养与收获：将绵羊肺炎支原体接种液接种步骤(1)的7‑8日龄的健康SPF鸡胚，每枚鸡胚接种0.2ml，接种后，孵化箱继续培养5d，无菌收获死亡鸡胚尿囊液和/或5d后仍未死亡鸡胚尿囊液，得到无血清绵羊肺炎支原体抗原本发明通过将绵羊肺炎支原体在鸡胚传代培养，收取鸡胚尿囊液，获得不含血清的绵羊肺炎支原体抗原。本发明方法不使用血清，可避免使用血清所存在的诸多问题。
绵羊肺炎支原体血清抗原鸡胚鸡胚接种死亡鸡胚孵化箱接种液尿囊液无血清日龄接种鸡胚尿囊液传代培养无菌收获制备健康血管清晰收获

[发明专利]甲鱼系统性败血症球状病毒的鸡胚培养方法-CN201210019141.9有效
发明人：李登峰;周永强;刘联国;彭娇;陈炯 -专利权人：宁波大学
申请日： 2012-01-20 - 公布日： 2012-08-08 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开了甲鱼系统性败血症球状病毒的鸡胚培养方法，特点是采用SPF鸡胚作为甲鱼系统性败血症球状病毒的体外培养体系，选择预先培养了4-6天的健康鸡胚，将预先制备好的甲鱼系统性败血症球状病毒接种液接种至鸡胚卵黄囊内，继续培养直至鸡胚出现死亡，收集死亡鸡胚进行匀浆离心分离，得到含甲鱼系统性败血症球状病毒的上清液，优点是首次将鸡胚培养技术应用于甲鱼系统性败血症球状病毒的培养，可实现甲鱼系统性败血症球状病毒进行快速、高效的体外传代培养且稳定
甲鱼系统性败血症球状病毒培养方法

[发明专利]一种无血清制备牛支原体抗原的方法-CN201910832526.9在审
发明人：陈胜利;储岳峰;郝华芳;颜新敏;刘永生 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-09-04 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供一种无血清制备牛支原体抗原的方法，包括以下步骤：(1)将新鲜的SPF种蛋孵化，培养7‑8天，挑选出健康鸡胚；(2)准备牛支原体接种液；(3)将牛支原体接种液接种选取的健康7‑8日龄SPF鸡胚，接种后，置于孵化箱中继续培养，观察鸡胚状态，收集接种死亡鸡胚，2‑8℃放置12‑24h；(4)无菌收集死亡鸡胚尿囊液，得到牛支原体无血清抗原。
无血清支原体接种支原体抗原死亡鸡胚接种液抗原鸡胚动物血清种蛋孵化孵化箱尿囊液滴度活菌日龄无菌制备健康新鲜观察生产

[发明专利]一种分离绵羊肺炎支原体的方法-CN201910832505.7在审
发明人：郝华芳;陈胜利;储岳峰;袁婷;颜新敏;刘永生 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-09-04 - 公布日： 2019-11-15 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供一种分离绵羊肺炎支原体的方法，包括以下步骤：(1)采集样品及样品处理，得到样品接种液；(2)鸡胚接种；(3)绵羊肺炎支原体的分离：收集接种后死亡鸡胚和/或9d后未死亡鸡胚，取鸡胚尿囊液进行绵羊肺炎支原体进行活菌检测，若收集鸡胚尿囊液绵羊肺炎支原体阳性，进行保存；若第1代鸡胚尿囊液均为阴性，则将收集鸡胚尿囊液盲传鸡胚，方法同上，若盲传3代仍为阴性，则判定样品为绵羊肺炎支原体阴性，弃去。
绵羊肺炎支原体鸡胚尿囊液阴性死亡鸡胚配制分离培养基动物血清高压灭菌活菌检测鸡胚接种样品处理样品接种培养基大容量盲传接种判定采集保存配备

[发明专利]三疣梭子蟹呼肠孤病毒的鸡胚培养方法-CN201210019133.4有效
发明人：李登峰;彭娇;刘联国;周永强;陈炯 -专利权人：宁波大学
申请日： 2012-01-20 - 公布日： 2012-08-08 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开了三疣梭子蟹呼肠孤病毒的鸡胚培养方法，特点是采用SPF鸡胚作为三疣梭子蟹呼肠孤病毒的体外培养体系，选择3-4日龄健康鸡胚，将预先制备的三疣梭子蟹呼肠孤病毒接种液接种至鸡胚尿囊膜上，继续培养直至鸡胚出现死亡，收集培养时间为3-10天的死亡鸡胚分离出尿囊膜与尿囊液，将尿囊膜与尿囊液混合后匀浆、离心、过滤即得到含三疣梭子蟹呼肠孤病毒的上清液，优点是提供一种更高效、更适用的三疣梭子蟹呼肠孤病毒体外培养方法，以对病毒进行快速、有效的体外传代培养，克服了在三疣梭子蟹呼肠孤病毒培养过程无合适培养体系，将填补蟹类病毒鸡胚培养体系的空白，并为以后的研究与应用奠定基础。
梭子蟹呼肠孤病毒培养方法

[发明专利]鸡传染性喉气管炎病毒的鸡胚培养方法-CN201310570209.7无效
发明人：魏锁成;巩转娣;张继瑜 -专利权人：魏锁成;巩转娣;张继瑜
申请日： 2013-11-16 - 公布日： 2014-03-05 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明提供鸡传染性喉气管炎病毒的鸡胚培养方法，将鸡传染性喉气管炎病毒株用病毒稀释液做5倍稀释，作为原液，再按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5的梯度稀释，分别取0.2mL经绒毛尿囊膜接种10日龄SPF鸡胚；鸡胚于37℃、56%相对湿度孵化148h，无菌收集72～148h死亡鸡胚，3500r/min离心20min，取上清液，用于下次传代，共传3代。无菌收集72～148h死亡鸡胚，将病变的尿囊液及绒毛尿囊膜置于研磨器，逐渐加入尿囊液，充分研磨，4000r/min离心30min，上清液即为病毒液，-20℃保存。
传染性气管炎病毒培养方法

[发明专利]大肠杆菌重组鸡α干扰素、重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用-CN201611220000.8有效
发明人：孙永珍;徐进;李厚伟;刘福涛 -专利权人：河南后羿生物工程股份有限公司
申请日： 2016-12-26 - 公布日： 2020-05-05 - 主分类号： C07K14/56 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌重组鸡α干扰素、重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用，属于基因工程领域。本发明通过优化鸡α干扰素基因序列并合成全基因，然后构建重组表达载体转化大肠杆菌，最后通过诱导表达和蛋白纯化获得纯度和含量较高的rChIFN‑α蛋白。重组干扰素rChIFN‑α在CEK细胞、鸡胚上和鸡体内对FAV‑4均具有抗病毒作用。其中，在CEK细胞上的抗病毒活性为4.17×106IU/mL；在鸡胚上能明显抑制FAV‑4增殖，延迟鸡胚的死亡时间；在鸡体内也能显著抑制FAV‑4复制，延迟感染鸡的死亡时间
大肠杆菌重组干扰素表达载体工程及其制备方法应用

[发明专利]H9N2亚型禽流感病毒标准样品的制备方法-CN201210082755.1无效
发明人：杜雄伟;李叶 -专利权人：大连民族学院
申请日： 2012-03-27 - 公布日： 2012-08-15 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开一种H9N2亚型禽流感病毒标准样品的制备方法，按如下步骤进行：a.将H9N2亚型禽流感病毒株用生理盐水作10倍连续稀释至10-8，每个稀释度接种5枚10日龄SPF鸡胚，每胚0.1ml，接种后置于37℃继续孵育，每日照蛋；b.逐个收获接种72~120h死亡鸡胚及120h活胚的尿囊液，分别测定每个鸡胚尿囊液的HA价，并以最高稀释度病毒感染的一枚鸡胚中的尿囊液作为传代接种物；c.依次重复a、b步骤两次，重复过程中a步骤的H9N2亚型禽流感病毒株为b步骤所产生的传代接种物；d.将最后一次b步骤所产生的传代接种物用生理盐水作10倍稀释，10倍稀释液接种于10枚10～11日龄SPF鸡胚的尿囊腔内，接种后继续孵育，每日照蛋，收获接种72～120h死亡鸡胚尿囊液，分装安瓿，-80℃温度保存。
h9n2 禽流感病毒标准样品制备方法

[发明专利]一种比较分析不同牛支原体菌株毒力的方法-CN201910833459.2在审
发明人：郝华芳;陈胜利;储岳峰;颜新敏;蔡莉娟;刘永生 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-09-04 - 公布日： 2020-02-18 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明的比较分析牛支原体菌株毒力的方法是将等活菌菌落浓度的经复苏传代的待比较分析的各待测牛支原体株、牛支原体标准株接种于鸡胚上，再将接种后的鸡胚置于恒温箱培养，定时检测鸡胚状态及死亡情况，统计接种各个菌株的卵黄囊接种鸡胚致死率、尿囊腔接种鸡胚致死率，结合死亡鸡胚尿囊液牛支原体分离鉴定情况，以此进行比较判定。
一种比较分析不同支原体菌株毒力方法

[发明专利]对虾白斑综合症病毒的鸡胚培养方法-CN201210018771.4无效
发明人：李登峰;刘联国;彭娇;陈炯;周永强;顾晓英 -专利权人：宁波大学
申请日： 2012-01-20 - 公布日： 2012-11-21 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开了对虾白斑综合症病毒的鸡胚培养方法，特点是采用SPF鸡胚作为对虾白斑综合症病毒的体外培养体系，选择预先培养了6-7天的健康鸡胚，将预先制备除菌了的对虾白斑综合症病毒接种液接种至鸡胚尿囊膜上，收集培养时间为5-10天的死亡鸡胚进行匀浆离心分离，得到含对虾白斑综合症病毒的上清液，优点是提供一种更高效、更适用的WSSV体外培养方法，以对WSSV进行快速、有效的体外传代培养，克服了在WSSV培养过程无合适培养体系，现有培养方法难以进行病毒传代培养的问题，因此鸡胚培养方法在WSSV中的应用将填补虾病毒鸡胚培养体系的空白，并为以后的研究与应用奠定基础。
对虾白斑综合症病毒培养方法

[发明专利]一种鸭甲型肝炎二价活疫苗效力检验方法-CN202011565934.1在审
发明人：卢凤英;张小飞;吴凤瑶;赵莎;刘青涛;沈丽雅 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2021-12-24 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供一种鸭甲型肝炎二价活疫苗效力检验方法，将含有血清1型鸭甲型肝炎和血清3型鸭甲型肝炎的混合抗原接种7~9日龄SPF鸡胚，24小时内死亡鸡胚弃去，收集接种后24~120小时所有的鸡胚组织，进行总RNA提取，分别利用DHAV‑1和DHAV‑3特异性引物进行RT‑PCR检测，琼脂糖凝胶电泳后，统计PCR阳性数，计算两种抗原的鸡胚半数感染量（EID50），从而避免了两种病毒鸡胚毒价测定时的相互影响本发明提供的两株鸭甲型肝炎病毒对于SPF鸡胚的接种增殖均具有良好的适应性，尤其适用于本发明所述的检测方法。
一种鸭甲型肝炎二价疫苗效力检验方法

[发明专利]一种新城疫鸡胚接种疫苗的制备方法及应用-CN201610098726.2在审
发明人：王红琳;温国元;邵华斌;罗青平;汪宏才;罗玲;张蓉蓉;张腾飞;艾地云;卢琴 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2016-02-23 - 公布日： 2016-07-13 - 主分类号： A61K39/17 文献下载
摘要：本发明公开了一种新城疫鸡胚接种疫苗的制备方法及应用，其制备方法包括以下步骤：将新城疫病毒TS09‑C株生产用毒种作适当稀释，接种发育良好的9～10日龄SPF鸡胚，每胚尿囊腔内接种0.1ml；接种后密封针孔，继续孵育，每4～8小时照蛋一次，死亡的鸡胚随时取出，将鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，吸取鸡胚液。收获后的胚液置于灭菌瓶中，加入适宜的抗生素，留样后，结冻保存。将检验合格的若干组鸡胚液滤过，混合于同一容器内，按规定羽份，加一定比例的蔗糖脱脂牛奶作稳定剂，同时加入适宜的抗生素，定量分装，迅速进行冷冻真空干燥。本发明鸡胚免疫方法具有安全、无任何毒副反应、减少应激、免疫效果好和成本低等优点。
一种新城疫鸡胚接种疫苗制备方法应用

[发明专利]一种鸡新城疫、禽流感同胚培养的方法-CN201510691948.0在审
发明人：沈建军;张秀文;李阳 -专利权人：浙江美保龙生物技术有限公司
申请日： 2015-10-23 - 公布日： 2016-03-02 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：一种鸡新城疫、禽流感同胚培养的方法，属于兽用生物制品技术领域。其采用鸡新城疫、禽流感特异性病毒稀释液稀释新城疫病毒至1000-5000倍，稀释禽流感病毒至5000-10000倍，分别在4℃孵育30-60分钟后按1:1比例混合均匀，接种9-10日龄鸡胚，0.1-0.15ml/胚，36-37℃继续培养至96小时，弃去48小时前死亡鸡胚，收获48-96小时死活胚液，既得鸡新城疫病毒、禽流感病毒混合病毒液。按本发明方法培养收获的病毒液提高了同胚培养的稳定性，大大降低了批次间差异，为后续疫苗生产工艺提供了优质的抗原液。
一种新城禽流感培养方法

[发明专利]一种鸭病毒性肝炎病毒及其应用-CN201810032661.0在审
发明人：徐保娟;孙厚民;王丽萍;孙健;李彬;刘平;曹志;宫晓;郭伟伟;韩乃君 -专利权人：青岛易邦生物工程有限公司
申请日： 2018-01-12 - 公布日： 2018-05-25 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明提供一种鸡胚适应性鸭病毒性肝炎病毒，其保藏编号为CCTCC No.V201761。本发明的鸡胚适应性鸭病毒性肝炎病毒用于制备疫苗。本发明从优势流行毒株中筛选出免疫原性良好的鸭病毒性肝炎病毒，经在SPF鸡胚传代，传至58代后获得的一株稳定的，免疫原性好的鸡胚适应疫苗制备毒株，接种鸡胚，收获死亡胚胚体和胚液，经研磨、冻融后收取病毒液，
鸭病毒性肝炎病毒疫苗免疫原性种鸡雏鸭病毒性肝炎新型鸭肝炎病毒传代甲醛溶液灭活鸡胚适应性保藏流行毒株疫苗制备研磨病毒液冻融毒株鸡胚胚体胚液乳化制备佐剂加油筛选收获死亡预防应用

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