本发明涉及一类抗病毒多肽及其制备方法与应用,所述抗病毒多肽含有如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.8所示的任意一种氨基酸序列,将所述抗病毒多肽基因转化至植物中具有显著的抗病毒效果,且对黄瓜花叶病毒、大麦条纹花叶病毒等多种病毒都具有较强的抗病毒作用。采用酵母表达系统制备所述抗病毒多肽,将表达多肽喷施至植物表面,植物的病毒侵染量显著降低。本发明提供的抗病毒多肽可以用于防治植物的多种病毒侵染,利用生物制剂在生产中进行植物保护,实现有效的植物免疫防御,从而减少农药使用,有效提高植物质量和产量,提高农作物的经济和社会效应。