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[发明专利]以失活的筛选剂抗性基因为报告体系的A·G碱基替换的细胞富集技术及其应用-CN201910938696.5有效
发明人：杨永星;杨进孝;康桂婷;王飞鹏;宋金岭 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2019-09-30 - 公布日： 2021-07-16 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明公开了以失活的筛选剂抗性基因为报告体系的A·G碱基替换的细胞富集技术及其应用。所述细胞富集技术载体包括如下试剂：靶向目标基因靶点序列的sgRNA、靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA、A·G碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；A·G碱基替换系统在靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA的向导下，可通过对功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行A·G碱基替换使功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。
筛选抗性基因报告体系碱基替换细胞富集技术及其应用

[发明专利]以突变的筛选剂抗性基因为报告体系的C·T碱基替换的细胞富集技术及其应用-CN201910939081.4有效
发明人：杨进孝;杨永星;赵思;李璐;袁爽 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2019-09-30 - 公布日： 2021-07-16 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明公开了以突变的筛选剂抗性基因为报告体系的C·T碱基替换的细胞富集技术及其应用。所述细胞富集技术包括如下试剂：sgRNA、C·T碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；sgRNA由靶向目标基因靶点序列的tRNA‑sgRNA和靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的tRNA‑sgRNA组成；功能丧失的筛选剂抗性基因为将筛选剂抗性基因进行无功能突变后得到的序列；C·T碱基替换系统可通过对含有所述突变位点的靶序列进行C·T碱基替换使功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。
突变筛选抗性基因报告体系碱基替换细胞富集技术及其应用

[发明专利]以失活的筛选剂抗性基因为报告体系的C·T碱基替换的细胞富集技术及其应用-CN201910938668.3有效
发明人：徐雯;杨进孝;张成伟;赵思;冯峰 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2019-09-30 - 公布日： 2021-07-16 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明公开了以失活的筛选剂抗性基因为报告体系的C·T碱基替换的细胞富集技术及其应用。所述细胞富集技术载体包括如下试剂：sgRNA、C·T碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；sgRNA由靶向目标基因靶点序列的tRNA‑sgRNA和靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的tRNA‑sgRNA组成；C·T碱基替换系统在靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的tRNA‑sgRNA的向导下，可通过对功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行C·T碱基替换使功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。
筛选抗性基因报告体系碱基替换细胞富集技术及其应用

[发明专利]将两个或两个以上外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体同一个整合位点的方法-CN201010563647.7有效
发明人：廖东庆;李晓明;黄日波;张云光;韦玉琴;梁莲华;李丛 -专利权人：南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2010-11-29 - 公布日： 2011-07-20 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了将两个或两个以上外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体同一整合位点的方法。首先将外源基因表达单元克隆到含抗性基因筛选标记A的整合质粒，利用整合质粒将外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体获得重组菌1，然后利用替换抗性基因筛选标记的质粒将重组菌1中的抗性基因筛选标记A替换为另一抗性基因筛选标记整合质粒再转化重组菌2，通过抗性基因筛选标记A和B进行筛选得到包含两个外源基因表达单元的重组菌。重复替换抗性基因和整合，可以获得两个以上相同或不同的外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体的重组菌。
两个以上基因表达单元整合枯草芽孢杆菌染色体同一个方法

[发明专利]差异代理技术在A·G碱基替换细胞富集中的应用-CN201910938672.X有效
发明人：杨进孝;赵久然;张成伟;徐雯;武莹;吕欣欣 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2019-09-30 - 公布日： 2021-07-16 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明的差异代理技术载体包括靶向目标基因靶点序列的esgRNA、靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA、A·G碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；A·G碱基替换系统在靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA的向导下，可通过对所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行A·G碱基替换使所述功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。
差异代理技术碱基替换细胞富集中的应用

[发明专利]整合质粒pOPHI及无抗性筛选标记的自主发光分枝杆菌-CN201210183007.2有效
发明人：张天宇 -专利权人：中国科学院广州生物医药与健康研究院
申请日： 2012-06-05 - 公布日： 2012-10-10 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种整合质粒pOPHI及无抗性筛选标记的自主发光分枝杆菌，所述整合质粒pOPHI包括启动子，发光所需酶基因（LuxCDABE），整合酶基因（Int）和抗性筛选基因的融合基因，位于融合基因两端的同向重复序列整合质粒pOPHI转入分枝杆菌后，经过传代培养筛选出抗性基因和整合酶基因均丢失的发光菌即为无抗性筛选标记的自主发光分枝杆菌。构建得到的无抗性筛选标记的自主发光分枝杆菌可通过细菌的发光与否来判断其死活，可用于多种实验检测，能快速得到可信的实验数据。
整合质粒 pophi 抗性筛选标记自主发光分枝杆菌

[发明专利]差异代理技术在C·T碱基替换细胞富集中的应用-CN201910938686.1有效
发明人：杨进孝;徐雯;杨永星;康桂婷;武莹;李璐 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2019-09-30 - 公布日： 2021-07-16 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明的差异代理技术载体包括如下试剂：sgRNA、C·T碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；sgRNA由靶向目标基因靶点序列的esgRNA和靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA组成；C·T碱基替换系统在靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA的向导下，可通过对所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行C·T碱基替换使所述功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。
差异代理技术碱基替换细胞富集中的应用

[发明专利]一种筛选转基因植物的方法及其所用的双价植物表达载体-CN02152036.4无效
发明人：谢龙旭;徐培林 -专利权人：中山大学
申请日： 2002-11-25 - 公布日： 2003-04-23 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供一种新型的筛选植物转化体的方法及其所用的植物双价表达载体。该方法用草甘膦抗性基因取代以往所用的抗生素抗性基因，作为筛选转基因植物品系的标记基因。方法中所用的植物双价表达载体含有草甘膦抗性基因和所要筛选的植物性状基因。本发明不仅能够高效筛选植物转化体，而且用作筛选标记基因的草甘膦抗性基因具有双重功效，一方面作为抗除草剂基因，另一方面作为一种植物筛选标记基因，并与其它的重要目的性状基因连锁起来转化植物，将大大方便转化植物的筛选以及纯系育种品种的筛选用本发明方法筛选的转基因植物，不仅具有良好的目的转化基因的性状，而且具有良好的抗草甘瞵性状。
一种筛选转基因植物方法及其所用表达载体

[发明专利]一种用百草枯筛选转基因植物的方法-CN201010530688.6有效
发明人：夏勉;乔琳;王丽英;孔祥凤;刘军华;李毅 -专利权人：北京未名凯拓作物设计中心有限公司
申请日： 2010-10-29 - 公布日： 2011-05-18 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于百草枯抗性的转基因植物的规模化筛选的双蛋白表达的表达盒，其依次包括第一启动子、目标基因、第一表达终止序列、第二启动子、潜在的百草枯抗性基因、和第二表达终止序列。另外，本发明还提供了基于该表达盒的载体、规模化筛选百草枯抗性的转基因植物和规模化筛选百草枯抗性和非百草枯抗性的抗性的转基因植物的方法。
一种百草筛选转基因植物方法

[发明专利]一种筛选稻瘟病抗性材料的篦子筛及其应用-CN202111461589.1在审
发明人：王继春;朱峰;王东元;田成丽;祁山颜;姜兆远;李莉;刘晓梅;孙辉;刘强;欧玉苹;高俊英 -专利权人：吉林省农业科学院
申请日： 2021-12-02 - 公布日： 2022-04-29 - 主分类号： C12Q1/18 文献下载
摘要：本发明公开了一种筛选抗稻瘟病(基因)材料的篦子筛及其应用，属于抗性育种技术领域。本申请通过大量实验筛选出与稻瘟病抗病基因对应的标准的优势无毒基因菌株篦子，能够定向给予水稻稻瘟病抗性压力，筛选出特定的稻瘟病抗性水稻品种(材料)，为水稻稻瘟病广谱抗性育种打下基础。
一种筛选稻瘟病抗性材料篦子及其应用

[发明专利]一种用于染色体整合、进化的表达质粒-CN201210060042.5有效
发明人：刘建忠;黄明涛;崔艳艳;陈韵妍 -专利权人：中山大学
申请日： 2012-03-08 - 公布日： 2012-07-11 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于染色体整合、进化的表达质粒，其含有2个FRT位点、抗性筛选基因a、复制子、噬菌体整合位点(attP)、启动子（P）及其后面的多克隆位点(MCS)、终止子（TTR）、用于诱导染色体进化过程的抗性筛选基因β、及启动子与抗性筛选基因β两侧连接的2个异源的核苷酸序列相同片段A1和A2，抗性筛选基因a与抗性筛选基因β为不同的抗性基因。该表达质粒可以通过简单的质粒转化将目的基因插入工程菌的染色体中，并可以通过化学诱导提高目的基因在染色体上的拷贝数，且操作简单，大大提高了目标产物的生产效率，适合于工业化生产。另外，所构建的工程菌因目的基因整合到染色体上，传代过程中不会丢失，遗传稳定性高，生产性能稳定。
一种用于染色体整合进化表达质粒

[发明专利]Bol024541基因在鉴定植物菌核病抗性中的用途-CN201610290091.6有效
发明人：梅家琴;钱伟;李月华 -专利权人：西南大学
申请日： 2016-05-05 - 公布日： 2020-10-02 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及Bol024541基因在鉴定植物菌核病抗性中的用途。本发明要解决的技术问题是为利用分子生物学方法鉴定植物菌核病抗性提供一种新选择。本发明的技术方案是Bol024541基因在鉴定植物菌核病抗性中的用途。本发明还提供了一种筛选植物报告基因用于qRT‑PCR鉴定植物菌核病抗性的方法，包括如下步骤：a、植物报告基因的筛选；b、植物报告基因稳定性鉴定；c、报告基因对植物核盘菌抗性指示效率的检测；d、抗性预测函数的构建本发明首次建立筛选植物报告基因的方法，以用于qRT‑PCR鉴定植物的菌核病抗性。
bol024541 基因鉴定植物菌核抗性中的用途

[发明专利]利用基因枪法和液体培养基抗性筛选的香蕉遗传转化方法-CN201911120576.0在审
发明人：黄永红;胡春华 -专利权人：青岛农业大学;广东省农业科学院果树研究所
申请日： 2019-11-15 - 公布日： 2020-04-28 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种利用基因枪法和液体培养基抗性筛选的香蕉遗传转化方法，所述利用基因枪法和液体培养基抗性筛选的香蕉遗传转化方法包括：材料处理；基因枪轰击；恢复培养；液体培养基筛选；体细胞胚诱导筛选；成熟的抗性体胚萌发；抗性小苗生根获得完整的转化植株。本发明采用基因枪投送质粒并结合液体培养基筛选的方法，可以更轻易获得再生植株，最终保证并提高香蕉转基因的成功率，试验验证，通过该方法可以得到能正常生长香蕉转基因植株，经检测，再生香蕉的阳性率可以达到100
利用基因枪法液体培养基抗性筛选香蕉遗传转化方法

[发明专利]染色体无标记随机整合载体pUTTns及其应用-CN200910033691.4无效
发明人：蒋建东;李荣;李顺鹏 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2009-06-25 - 公布日： 2010-04-07 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：pUTTnsKm、pUTTnsCm和pUTTnsTet分别为含卡那霉素、氯霉素和四环素抗性基因的载体。该系列载体可通过转座子Mini-Tn5将外源基因随机整合到G-细菌染色体上，先通过抗性基因筛选整合子，再通过同向重复序列之间的重组将抗性基因删除，用反筛选标记基因sacB将抗性基因删除的重组子筛选出来，构建出无外源抗性基因标记的工程菌株。本发明载体具有使用范围广、能多次整合外源基因、操作简单方便等优点，所构建工程菌株遗传稳定、不含外源抗性基因、生态安全性高，为生态安全型基因工程菌构建提供了新的方法和技术平台。
染色体标记随机整合载体 puttns 及其应用

[发明专利]用于富集CRISPR/Cas9介导的同源重组修复细胞的筛选报告载体及筛选方法-CN201910244538.X有效
发明人：张智英;闫娜娜;孙永森;徐坤;房圆圆;邓竞荣;穆璐 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2019-03-28 - 公布日： 2020-12-01 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于富集CRISPR/Cas9介导的同源重组修复细胞的筛选报告载体及筛选方法。筛选报告载体包括通用sgRNA表达盒、Cas9表达盒、抗性基因表达盒以及抗性基因同源重组修复模板，筛选报告载体自身可以通过抗性基因序列同源重组修复而使细胞产生抗性。所述的筛选报告载体与用于细胞基因组HDR编辑的打靶载体及供体载体组成共转染系统，可应用于高效富集发生点编辑、片段插入和片段删除的HDR阳性细胞克隆，并且可广泛应用于哺乳动物的多种细胞，显著提高了HDR编辑细胞的筛选效率，同时无需对细胞基因组的无关位置再引入双链断裂与DNA整合，为推动精准基因编辑的研究和应用提供有效途径。
用于富集 crispr cas9 同源重组修复细胞筛选报告载体方法

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