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[发明专利]一种高效的慢病毒生产体系及其生产方法-CN201810371657.7有效
发明人：高山 -专利权人：高山
申请日： 2018-04-24 - 公布日： 2019-07-19 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明提供一种高效的慢病毒生产体系及其生产方法，该慢病毒生产体系为由携带外源基因的载体质粒和3个包装质粒pLP1、pLP2‑rev、pLP‑VSVG构成的四质粒表达系统，包装质粒pLP1表达慢病毒的基本结构基因gag/pol，包装质粒pLP2表达慢病毒的调节基因rev，包装质粒pLP‑VSVG表达慢病毒的胞膜蛋白基因VSVG，其中，这四种质粒的比例为pLP1：pLP2：pLP‑VSVG：载体质粒＝9:6:9:利用本发明慢病毒生产体系及其生产方法，能够获得高达10⁹pfu/ml数量级的高滴度的病毒。
慢病毒包装质粒生产体系载体质粒蛋白基因调节基因外源基因质粒表达高滴度胞膜生产种质病毒基因携带

[发明专利]递送外源RNP的慢病毒载体及其制备方法-CN201910979334.0有效
发明人：蔡宇伽;凌思凯 -专利权人：上海本导基因技术有限公司
申请日： 2019-10-15 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种递送外源RNP的慢病毒载体及其制备方法；通过将含有慢病毒载体基因组序列的质粒转染入病毒生产细胞，制备而得；所述基因组序列分别位于表达膜蛋白的质粒、表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达形成RNP所需蛋白质的质粒和表达含RNA结合蛋白所识别的RNA茎环结构的外源目的RNA的质粒上。在包装含RNP的慢病毒颗粒的过程中，补充慢病毒GagPol长链蛋白，减少了改造后的慢病毒GagPol长链蛋白所包含的外源RNA结合蛋白对病毒颗粒正常形态的负面影响，保证了慢病毒颗粒外壳的完整性和细胞感染活性的稳定性
递送 rnp 病毒载体及其制备方法

[发明专利]一种慢病毒的包装方法-CN202210033123.X在审
发明人：曾皓宇;沈振波;蒋碧愉;刘康志;赵燕玲 -专利权人：广东普罗凯融生物医药科技有限公司
申请日： 2022-01-12 - 公布日： 2022-05-10 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供一种慢病毒的包装方法，包括以下步骤：(1)将质粒添加到无血清培养基中，得到质粒混合物；质粒包括慢病毒包装质粒和目标表达质粒；慢病毒包装质粒包括psPAX2、pMD2.G；(2)将转染介质添加到无血清培养基中，得到转染试剂；(3)将质粒混合物和转染试剂混合均匀，并加入到工具细胞中，转染并培养2～10h，更换培养基为减血清培养基，继续培养，收集上清，浓缩，得到慢病毒。本发明提供的慢病毒的包装方法中，利用目标表达质粒和两种包装质粒对工具细胞进行共转染，使得慢病毒能够稳定包装工具细胞，提高慢病毒的包装效率以及慢病毒的滴度。
一种病毒包装方法

[发明专利]一种HIV药物筛选细胞模型及其专用假型慢病毒-CN200810118435.0无效
发明人：童贻刚;李敬云;张昕;安小平;周育森 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所
申请日： 2008-08-15 - 公布日： 2009-01-28 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种HIV药物筛选细胞模型及其专用假型慢病毒。本发明构建了表达HIV的Gag基因和Pol基因的重组表达质粒、表达报告基因的重组慢病毒质粒和表达HIV Rev基因的重组质粒。将上述3种质粒和表达疱疹性口炎病毒壳G糖蛋白基因的重组表达质粒共转染哺乳动物细胞，成功获得了假型慢病毒。将假型慢病毒感染哺乳动物细胞，可得到基于报告基因的HIV药物筛选细胞模型。本发明提供的药物筛选细胞模型，使用单次感染的病毒，具有良好的安全性，并且报告基因使该细胞模型具备极高的敏感性。
一种 hiv 药物筛选细胞模型及其专用假型慢病毒

[发明专利]用DNA标签标记的基因过表达慢病毒质粒文库及其制备方法和应用-CN202111565332.0在审
发明人：傅征;武莹;韩连斌;李双;刘振欣;令狐玉婷 -专利权人：北京镁伽科技有限公司
申请日： 2021-12-20 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及质粒文库领域，具体涉及一种用DNA标签标记的慢病毒质粒文库及其制备方法和应用。本发明的慢病毒质粒文库包括多个慢病毒质粒，所述慢病毒质粒由5’端到3’端的顺序含有以下元件：筛选标记基因表达盒、一个基因ORF表达盒、通用序列和一个DNA标签序列，各个慢病毒质粒上的DNA标签序列不同；其中，所述基因ORF表达盒含有启动子和一个基因的ORF序列。本发明的慢病毒质粒文库可以通过通用PCR引物对DNA标签序列进行富集和测序检测，以指征对应的被整合的基因ORF序列，从而实现在同一管中方便且低成本的检测整合到目的细胞的目的基因，以进行后续体内或体外的各种生物学功能基因的筛选实验
dna 标签标记基因表达病毒质粒文库及其制备方法应用

[发明专利]一种高效表达小鼠促性腺激素抑制激素基因的慢病毒载体及其应用-CN201710311940.6在审
发明人：王水莲;曾杰;龚金秋;阳美霞;唐姣美 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2017-05-05 - 公布日： 2017-08-18 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：一种高效表达小鼠促性腺激素抑制激素(简称GnIH)基因的慢病毒载体，该慢病毒表达载体是将GnIH序列插入pLVX‑IRES‑ZsGreen1质粒中构成。本发明构建了含有GnIH基因的慢病毒过表达质粒，并对其进行了体外细胞水平的实验，结果表明GnIH慢病毒过表达质粒转入细胞后能高效地促进GnIH基因表达，GnIH mRNA的表达提高1200倍以上。GnIH过表达后能够显著抑制小鼠卵巢颗粒细胞增殖和降低雌激素分泌水平，并对颗粒细胞凋亡具有明显的促进作用。因而，本发明所构建的慢病毒表达载体可用于制备促进小鼠促性腺激素抑制激素表达的制剂。
一种高效表达小鼠促性腺激素抑制激素基因病毒载体及其应用

[发明专利]PSTK慢病毒表达载体、宿主细胞及应用-CN202310535577.1在审
发明人：郑栋 -专利权人：苏州大学
申请日： 2023-05-12 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本申请涉及一种PSTK慢病毒表达载体、宿主细胞及应用，该PSTK慢病毒表达载体为在慢病毒质粒的克隆位点插入人源PSTK基因得到的重组质粒。本申请构建的PSTK慢病毒表达载体可以用于高效构建含有PSTK基因的重组病毒，并可用于药物的研究、评价；同时，将其用于感染宿主细胞，可以用于构建稳定高表达PSTK的重组细胞，受体活性完整并可用于相关药物的研发测试
pstk 病毒表达载体宿主细胞应用

[发明专利]一种用于肠外营养相关性肝病药物-CN201710638556.7有效
发明人：朱雪萍;汪健;朱晓黎;崔宁迅;崔铭玲;李洁;陈小倩;黄凤霞;李之珩 -专利权人：苏州大学附属儿童医院
申请日： 2017-07-31 - 公布日： 2020-11-10 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于肠外营养相关性肝病药物，将慢病毒包装质粒、包膜表达质粒与干扰表达载体质粒组合成三质粒慢病毒表达系统，然后共转染至包装细胞，经培养后裂解得到用于肠外营养相关性肝病药物；本发明设计特异性干扰IRE1α基因的shRNA包装成慢病毒，从而高效导入BRL细胞，可实现IRE1α基因稳定的干扰效果，实现肠外营养相关性肝病的缓解、治疗。
一种用于营养相关性肝病药物

[发明专利]一种用于制备CAR-T的慢病毒载体及其构建方法和应用-CN201910512556.1有效
发明人：张文;刘江;唐东起 -专利权人：山东大学第二医院
申请日： 2019-06-13 - 公布日： 2020-09-01 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于制备CAR‑T的慢病毒载体质粒及其制备方法和用途，含有双启动子；酶切位点充足，易于插入基因；含有T2A序列，T2A序列能使连接的两个基因同时表达；本发明的用于制备CAR‑T的慢病毒载体，酶切位点充足，组件丰富，易于改造，方便载体的构建；本发明的用于制备CAR‑T的慢病毒载体应用广泛，可用于构建单CAR及多CAR、表达自杀基因或筛选基因等，也可用于构建表达细胞因子的第四代CAR，能满足CAR‑T中慢病毒载体质粒同时表达多个基因的要求；利用该慢病毒载体包装的慢病毒滴度高，利用该慢病毒载体质粒制备的慢病毒感染T细胞的效率高，并且制备的CAR‑T细胞具有较大的杀伤力。
一种用于制备 car 病毒载体及其构建方法应用

[发明专利]制备慢病毒颗粒包装EBOVRNA作为EBOV核酸检测阳性参考品的方法-CN201910978070.7在审
发明人：危宏平;余军平;熊进 -专利权人：中国科学院武汉病毒研究所
申请日： 2019-10-15 - 公布日： 2020-01-10 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了制备慢病毒颗粒包装EBOV RNA作为EBOV核酸检测阳性参考品的方法，制备方法将EBOV的三个基因NP、GP和L基因的部分片段串联后整合到慢病毒的表达载体中，将构建的慢病毒表达质粒与包装质粒分别在工程大肠杆菌菌株中扩增，得到大量的质粒，再将构建的表达质粒和包装质粒共同转染至HEK293T细胞中，经细胞表达后得到大量的包装了EBOV的RNA基因的慢病毒颗粒。该制备慢病毒颗粒包装EBOV RNA作为EBOV核酸检测阳性参考品的方法，得到的颗粒作为EBOV核酸检测的阳性参考品，具有很好模拟实际样本中从病毒核酸提取到核酸检测的整个过程的优点，将EBOV的假病毒颗粒通过冻干保护剂进行冻干后得到的冻干粉
核酸检测慢病毒颗粒阳性参考品制备包装质粒构建慢病毒表达质粒大肠杆菌菌株基因工程技术冻干保护剂假病毒颗粒表达载体表达质粒病毒核酸片段串联细胞表达冻干粉基因NP 慢病毒冻干扩增整合质粒转染样本

[发明专利]抑制Six2基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法-CN201410392405.4在审
发明人：高锦;高殿帅;亢小玉;李俐;孙申;张宝乐;李亨;姚瑞芹 -专利权人：徐州医学院
申请日： 2014-08-11 - 公布日： 2014-12-10 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了抑制Six2基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法。抑制Six2基因表达的shRNA，序列为SEQ ID NO.2。一种Six2基因shRNA敲除慢病毒表达载体，将所述的shRNA插入载体质粒pLVX-EF1α-IRES-Puro的BamH I及EcoR I酶切位点所得。将所述的慢病毒载体质粒和包装质粒pLP1及pLP/VSVG转染293T细胞获得慢病毒pLV-shSix2。本发明筛选得到对Six2基因表达具有明显抑制作用的shRNA，并在此基础上成功构建了敲减Six2的慢病毒表达载体及慢病毒，获得了稳定敲除Six2基因的MES23.5细胞株，为进一步研究Six2的功能打下了良好的基础
抑制 six2 基因表达 shrna 病毒载体及其构建方法

[发明专利]一种用于肠外营养相关性肝病药物的制备方法-CN201710638211.1有效
发明人：朱雪萍;汪健;朱晓黎;崔宁迅;崔铭玲;李洁;陈小倩;黄凤霞;李之珩 -专利权人：苏州大学附属儿童医院
申请日： 2017-07-31 - 公布日： 2020-04-28 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于肠外营养相关性肝病药物的制备方法，将慢病毒包装质粒、包膜表达质粒与干扰表达载体质粒组合成三质粒慢病毒表达系统，然后共转染至包装细胞，经培养后裂解得到肠外营养相关性肝病药物；本发明设计特异性干扰IRE1α基因的shRNA包装成慢病毒，从而高效导入BRL细胞，可实现IRE1α基因稳定的干扰效果，实现肠外营养相关性肝病的缓解、治疗。
一种用于营养相关性肝病药物制备方法

[发明专利]促进间质干细胞TSP4过表达的方法及其制剂和应用-CN201910309552.3在审
发明人：张倩;刘韬 -专利权人：深圳市罗湖区人民医院
申请日： 2019-04-17 - 公布日： 2020-10-27 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种通过慢病毒感染促进间质干细胞TSP4过表达的方法，通过pCMV6‑Thbs4质粒和pENTR11质粒载体得到pENTR11‑TSP4表达质粒；然后将pENTR11‑TSP4表达质粒与Plv‑Easy‑T质粒连接得到Plv‑Easy‑GFP‑TSP4慢病毒表达质粒；再通过包装得到Plv‑Easy‑GFP‑TSP4慢病毒；最后利用Plv‑Easy‑GFP‑TSP4慢病毒感染间质干细胞，将病毒基因片段整合到间质干细胞的基因组中，得到TSP4过表达的间质干细胞，提高间质干细胞促血管生成活化效率，从而间质干细胞在缺血性疾病治疗药物中的应用，尤其是缺血性中风治疗药物中的应用。
促进间质干细胞 tsp4 表达方法及其制剂应用

[发明专利]具有抑制神经胶质瘤作用的miRNA及其构建的载体和应用-CN201410474742.8在审
发明人：邓艳春;王莉 -专利权人：邓艳春
申请日： 2014-09-17 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种应用遗传工程的方法在细胞内获得高效表达miRNAs的构建方案，以及用该方案获取的重组腺病毒和真核表达质粒在肿瘤治疗药物制备中的用途。用定向克隆、同源重组、转染、慢病毒包装等技术，获得重组慢病毒和真核表达质粒，即在同源重组位点插入miR-483-5p、miR-219-5p、miR-338-3p前体片段，所获得重组慢病毒和真核表达载体能在胶质瘤等肿瘤细胞内复制增殖；插入的片段在肿瘤细胞内高效表达成熟的miRNAs，升高肿瘤细胞内以上3个分子的表达水平。该慢病毒和真核表达质粒在肿瘤治疗药物中具有独特的实用价值。
具有抑制神经胶质作用 mirna 及其构建载体应用

[发明专利]一种利用可诱导表达狂犬病病毒蛋白的稳定细胞系生产狂犬病病毒假病毒系统的方法-CN202111648568.0在审
发明人：秦晓峰;陈正亮;陶柳性;金洁莹;梁梦迪 -专利权人：睿丰康生物医药科技（浙江）有限公司
申请日： 2021-12-30 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：一种利用可诱导表达狂犬病病毒蛋白的稳定细胞系生产狂犬病病毒假病毒系统的方法，包括：表达狂犬病病毒GP蛋白重组质粒的构建；重组质粒通过慢病毒三质粒或四质粒系统转染进HEK293T细胞内进行慢病毒包装得到慢病毒Lenti‑TRE‑RABV；将携带Tet‑ON基因的慢病毒感染宿主细胞筛选后得到表达Tet‑ON基因的细胞系；Lenti‑TRE‑RABV转染表达Tet‑ON基因的细胞系筛选后得到可诱导表达狂犬病病毒GP蛋白的细胞系；狂犬病病毒假病毒的包装生产。本发明生产的狂犬病病毒假病毒与天然狂犬病病毒结构相似，具有病毒批间差异小、稳定性好、病毒滴度高、具备规模化生产能力等特点，可应用于狂犬病病毒中和抗体检测、评价，疫苗研发及药物筛选等领域。
一种利用诱导表达狂犬病病毒蛋白稳定细胞系生产系统方法

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