本发明涉及天然产物提取技术领域,特别涉及一种具有免疫增强活性的姬松茸多肽提取物及其制备方法和应用。该姬松茸多肽提取物中包含有氨基酸序列如SEQ ID NO.1~5所示的肽段,采用超声辅助酶解法,经超滤纯化后制得,分子量大小为3‑5 kDa。通过采用RAW264.7小鼠单核巨噬细胞模型进行免疫活性检测,发现该姬松茸多肽提取物可显著促进巨噬细胞增殖、吞噬中性红和释放NO,同时上调细胞因子(IL‑6、IL‑1β、TNF‑α)分泌,具有较佳的免疫增强能力本发明制得的姬松茸多肽提取物纯度高,制备工艺简单,适合企业大规模生产,可作为天然高效免疫增强剂,在保健品、医药领域具有广阔的应用前景。