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[发明专利]一种DNA长度可控片段化方法及其在构建文库中的应用-CN201810239733.9在审
发明人：吴雅坤;林振华 -专利权人：苏州泰康吉安仪器科技有限公司
申请日： 2018-03-22 - 公布日： 2018-09-04 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种DNA长度可控片段化方法及其在构建文库中的应用，可用于cDNA与双链DNA的可控片段化，及其文库的构建。在单链cDNA分子片段化中，通过向合成与RNA模板互补的cDNA链的反转录反应中加入dUTP，得到含有dU碱基的cDNA；在双链DNA分子的片段化中，通过向合成双链DNA的PCR反应中加入dUTP，得到含有dU碱基的双链DNA；在所述cDNA与双链DNA上的dU碱基处进行酶处理，断裂DNA分子，生成片段化的cDNA与双链DNA；将片段化的cDNA与双链DNA进行末端补平处理。通过上述方式，本发明能够制备长度可调的片段化DNA，便于提高cDNA与双链DNA文库的建库效率，同时能消除长片段DNA不能有效测通的缺陷，并为长片段DNA序列的拼接提供校正序列。本方法可用于基于DNA扩增反应的测序文库构建。
双链DNA 片段化构建文库可控长片段DNA 碱基可用双链DNA分子片段化DNA 测序文库长度可调单链cDNA 分子片段合成双链断裂DNA 反转录碱基处酶处理补平建库拼接制备校正应用合成

[发明专利]包含来自靶基因的序列的连接DNA片段的特异性制作方法-CN201080039384.8有效
发明人：黑泽信幸;矶部正治 -专利权人：国立大学法人富山大学
申请日： 2010-09-02 - 公布日： 2012-07-18 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明的目的在于提供：对于任意的靶基因，无论包含靶基因序列的DNA片段是否纯化，都可以选择性地得到仅使靶基因片段与其他目标DNA片段结合的“连接DNA片段”的方法。本发明涉及使包含序列A和/或序列B的连接用双链DNA片段选择性地与靶基因片段的各末端侧连接的方法。使用处于规定的关系的3’端突出双链基因片段和连接用双链DNA片段，将上述3’端突出双链基因片段和上述连接用双链DNA片段的混合物供给至少两个循环的热变性、再缔合和DNA合成反应，得到包含一个以上的连接有上述序列A、上述靶基因的序列和上述序列B的一个单元的序列的双链DNA片段即“连接DNA片段”。通过类似的方法，还可得到“单侧连接DNA片段”。
包含来自基因序列连接 dna 片段特异性制作方法

[发明专利]扩增核酸序列的方法-CN201680054169.2有效
发明人：陈崇毅;邢栋;X·S·谢 -专利权人：哈佛学院董事及会员团体
申请日： 2016-07-15 - 公布日： 2022-08-19 - 主分类号： C12Q1/6865 文献下载
摘要：提供了用于核酸扩增的方法，包括使双链核酸和与转座子DNA结合的转座酶接触，其中转座子DNA包括转座酶结合位点和RNA聚合酶启动子序列，其中转座酶/转座子DNA复合物结合沿双链核酸分布的靶位置并且将双链核酸切割成多个双链片段，各双链片段具有结合双链片段各5'端的转座子DNA，沿着转座子DNA延伸双链片段以制备在各末端具有双链RNA聚合酶启动子序列的双链延伸产物，使双链延伸产物与RNA聚合酶接触以制备各双链延伸产物的多个RNA转录物，将RNA转录物逆转录成单链拷贝DNA，形成针对单链拷贝DNA的互补链，以形成对应各双链片段的多个双链DNA扩增子。
扩增核酸序列方法

[发明专利]试剂盒及其在核酸测序中的用途-CN201480081856.4有效
发明人：耿春雨;于竞;祝珍珍;章文蔚;李计广;龚梅花;蒋慧;贺玲瑜 -专利权人：深圳华大智造科技有限公司
申请日： 2014-09-12 - 公布日： 2020-11-03 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：提供了一种试剂盒、一种基于双链DNA制备环状双链DNA的方法、一种制备双链核酸融合分子的方法、一种基于双链DNA片段构建测序文库的方法、一种核酸测序方法、一种基于双链DNA制备环状双链DNA的装置、一种基于双链DNA片段构建测序文库的设备以及一种核酸测序系统。
试剂盒及其核酸中的用途

[发明专利]在双链DNA片段末端产生预定粘性末端的方法-CN201210057073.5有效
发明人：陈威华;赵国屏 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院;国家人类基因组南方研究中心
申请日： 2012-03-06 - 公布日： 2013-09-18 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及在双链DNA片段末端产生预定粘性末端的方法。揭示了一种新的在双链DNA片段末端产生预定粘性末端的方法，所述方法通过构造修饰状态与双链DNA内部不同的含可切割酶切识别位点的双链DNA末端，可以特异性地将双链DNA的末端转变成预设的粘性末端，不需要考虑DNA内部的序列组成和酶切位点组成。利用本发明的方法，可方便、快捷、准确地获得预定的粘性末端，从而实现长链DNA连接，且不引入多余的DNA序列。
dna 片段末端产生预定粘性方法

[发明专利]微量DNA甲基化高通量测序方法-CN201980092829.X在审
发明人：杨林;张艳艳;陈恬;杨贵芳;陈芳;蒋慧 -专利权人：深圳华大智造科技股份有限公司
申请日： 2019-05-21 - 公布日： 2021-10-08 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了一种微量DNA甲基化高通量测序方法。本发明提供的方法，依次包括如下步骤：(1)将双链DNA片段连接接头1，得到连接产物；接头1由两条单链DNA分子组成，命名为单链1‑1和单链1‑2；连接产物中，双链DNA片段的每条链的3’末端与单链1‑1的5’末端连接，双链DNA片段的每条链的5’末端与单链1‑2的3’末端相邻但不连接；(2)进行亚硫酸盐处理；(3)采用通用引物1进行DNA复制；(4)3’末端连接测序接头。
微量 dna 甲基化通量方法

[发明专利]抗双链DNA抗体、核苷酸片段、磁珠及提取外周血游离DNA的方法-CN202211104787.7在审
发明人：杜子谦;吴斐然;黄奕芝;段生宝;王红梅;陈晔洲;丁少华;李勇 -专利权人：季华实验室
申请日： 2022-09-09 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C07K16/44 文献下载
摘要：本申请涉及生物技术领域，公开了一种抗双链DNA抗体、核苷酸片段、磁珠及提取外周血游离DNA的方法。所述抗双链DNA抗体，包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本申请中利用单克隆抗体的特异性、专一性的特点，提取外周血游离的DNA，不受DNA片段大小的限制，尤其适合小片段的DNA的纯化，可显著提高外周血游离DNA提取时的回收率，尤其对于含有小片段DNA或者DNA
抗双链 dna 抗体核苷酸片段提取外周血游离方法

[发明专利]用于构建检测染色体拷贝数变异的测序文库的方法和试剂盒-CN202210143977.3在审
发明人：侯丽敏;陈迪;张建光;张丽 -专利权人：北京贝瑞和康生物技术有限公司
申请日： 2022-02-17 - 公布日： 2022-03-18 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：所述方法包括以下步骤：1）提供基因组DNA或RNA/DNA杂合双链样品；2）向上述样品中加入核酸内切酶和DNA聚合酶，利用切口平移原理将DNA双链或RNA/DNA杂合双链随机打断得到DNA片段并在片段末端加A，以得到加A后的DNA片段；3）将所述加A后的DNA片段与测序接头连接获得连接产物；4）纯化所述连接产物，获得测序文库。所述试剂盒包括：1）随机打切口并进行切口平移和末端加A的试剂；2）将所述加A后的DNA片段与测序接头连接的试剂；和3）用于纯化所述连接产物的试剂。
用于构建检测染色体拷贝变异序文方法试剂盒

[发明专利]一种用于基因扩增的方法-CN200480034735.0无效
发明人：堀内嵩;渡边孝明 -专利权人：独立行政法人科学技术振兴机构
申请日： 2004-11-12 - 公布日： 2006-12-27 - 主分类号： C12N15/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种为高速基因扩增而特别构建的双链DNA，一种利用双链DNA进行基因扩增的方法以及一种生产蛋白质的方法。根据体内基因复制的机制构建了一种诱导高速人工基因扩增的系统(BIR)。构建了包括排列A－B－C和A’－B’－C’或A’－B’－C’的反向排列的双链DNA。A和A’是能进行相互同源重组的双链DNA片段，并且所述DNA片段以反向方向相互排列；B和B’是扩增节段，其中所述基因中的至少一个或另一个含有用于扩增的靶基因；C和C’是能进行相互同源重组的双链DNA片段，其中所述DNA片段以反向方向相互排列，在C和C’之间可以插入任何DNA序列。将双链DNA整合到染色体或质粒内，并且对切割任意的特异序列的酶的诱导诱导特异位点上的断裂，这就启动了高速的基因扩增。
一种用于基因扩增方法

[发明专利]一种测序用DNA文库-CN201710647896.6有效
发明人：潘伟业;王占东;赵雪丹;程世月;玄兆伶;李大为;梁峻彬;陈重建 -专利权人：浙江安诺优达生物科技有限公司;安诺优达基因科技（北京）有限公司;安诺优达（义乌）医学检验有限公司
申请日： 2017-08-01 - 公布日： 2022-08-23 - 主分类号： C40B40/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种测序用DNA文库。本发明的测序用DNA文库包括第一双链DNA分子，所述第一双链DNA分子包括第一DNA链，该第一DNA链从5'端起依次包括位于5'端的桥式引物DNA序列1、目的片段特异性扩增引物DNA序列1、待读取DNA序列S、目的片段特异性扩增引物DNA序列2的反向互补序列以及位于3'端的桥式引物DNA序列2的反向互补序列，所述桥式引物DNA序列1和所述桥式引物DNA序列2是测序芯片上的DNA序列，所述目的片段特异性扩增引物DNA序列1和所述目的片段特异性扩增引物DNA序列2用于对包含待读取DNA序列S的目的DNA片段进行特异性扩增的引物DNA序列。本发明的测序用DNA文库能够增加单轮测序反应中碱基读取复杂度，从而提高测序质量。
一种测序用 dna 文库

[发明专利]与RNA对应的双链DNA的合成方法以及扩增方法-CN201080020926.7无效
发明人：林田幸信 -专利权人：和光纯药工业株式会社
申请日： 2010-05-11 - 公布日： 2012-04-25 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明提供一种价格低廉、操作简便，由特定RNA合成对应的双链DNA的方法以及扩增该双链DNA的方法。含有与具有polyA的模板RNA相对应的碱基序列的双链DNA的合成方法，其特征在于，工序1为使用5’末端添加已知序列的DNA片段的寡聚(dT)引物，对具有polyA的模板RNA进行逆转录反应，得到单链DNA；工序2为在不具有3’→5’核酸外切酶活性和链置换活性的聚合酶的存在下，使用5’末端添加已知序列的DNA片段的随机引物，将工序1中得到的单链DNA进行双链化反应，得到双链DNA。本发明还提供含有与具有polyA的模板RNA相对应的碱基序列的双链DNA的扩增方法，其特征在于，工序3为将得到的双链DNA进一步进行PCR反应。
rna 对应 dna 合成方法以及扩增

[发明专利]制造双链DNA片段的方法-CN201880055170.6在审
发明人：伊藤雄介;佐藤知香子;谷内江望 -专利权人：丝芭博株式会社
申请日： 2018-08-28 - 公布日： 2020-04-24 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明涉及通过双重不对称PCR(DA‑PCR)制造具有期望的碱基序列的双链DNA片段的方法。该方法具备：(1)准备各自相当于双链DNA片段的有义链的一部分的两种以上的寡核苷酸(有义寡核苷酸)和各自相当于双链DNA片段的反义链的一部分的两种以上的寡核苷酸(反义寡核苷酸)，将等浓度的各种寡核苷酸与DNA聚合酶和dNTP混合而制备反应混合液的步骤；(2)使用步骤(1)的反应混合液进行PCR的步骤；(3)向步骤(2)的反应混合液中添加能够扩增双链DNA片段的全长的引物对的步骤；和(4)使用步骤(3)
制造 dna 片段方法

[发明专利]使用尿液和其他DNA的特征的方法-CN202180082554.9在审
发明人：卢煜明;陈君赐;江培勇;郑淑恒;周泽;解婷婷;王广亚;丁晨 -专利权人：香港中文大学;格里尔有限责任公司
申请日： 2021-12-07 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：无细胞的DNA片段的末端可用于生物样品的分析。在一些实施方案中，可以分析来自尿液样品的DNA。无细胞的DNA片段通常包括锯齿状末端，其中双链DNA的一条链的一端延伸超过另一条链的另一端。某些区域中的片段末端的密度也可以用于对状况的水平进行分类。另外，DNA片段可以表现出周期性模式，其中DNA片段的量对应于突出部分的长度。可以分析周期性以确定生物样品的特征。也可以利用避免剪切双链DNA的突出3’端的技术分析锯齿状末端。
使用尿液其他 dna 特征方法

[发明专利]一种基于双端测序重叠片段和DNA双链互补片段的超低频突变检测方法-CN202211059866.0在审
发明人：尤馨悦;铃木孝昌;栾洋;奚晶;曹易懿 -专利权人：上海交通大学医学院
申请日： 2022-08-30 - 公布日： 2022-11-22 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于双端测序重叠片段和DNA双链互补片段的超低频突变检测方法，包括选择不依赖于PCR扩增的方法构建DNA文库，结合使用TE缓冲液、缩短片段化时间进行基因组DNA片段化和使用特异性酶末端修复减少测序错误，缩短文库片段长度产生双端测序重叠片段结合互补链信息获得DNA模板的拷贝片段进行测序错误校正，选择内源性标签对拷贝片段进行标记，根据互补链来源的双端读段在基因组上比对位置相同、比对方向相反提取拷贝片段，
一种基于双端测序重叠片段 dna 互补低频突变检测方法

[发明专利]一种用于制备DNA Ladder的引物对、DNA片段及方法-CN201810257231.9有效
发明人：董伟仁 -专利权人：浙江大学
申请日： 2018-03-27 - 公布日： 2020-10-20 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于制备DNA Ladder的引物对、DNA片段及方法。该引物对扩增获得的双链DNA片段5’端和3’端具有相同的一段序列，该双链DNA片段既能作为PCR反应的引物，又能作为模板。随着PCR循环数的增加，小片段的DNA片段在PCR体系中逐渐减少，而扩增得到的大片段则逐渐增加，控制PCR循环数即可获得分子量相差固定核苷酸数量大小的DNA Ladder。利用本发明中的DNA Ladder制备方法，可以在一次PCR反应中制备出片段浓度相对均一的DNALadder，该方法克服了单片段PCR扩增法所需劳动强度大、多片段PCR扩增法条件优化复杂等缺陷，能够快速地制备DNA Ladder。
一种用于制备 dna ladder 引物片段方法

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