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[发明专利]一种CRISPR单碱基修复系统及其应用-CN201811284549.2在审
发明人：胡争;周灿权;樊惟文;麦庆云 -专利权人：中山大学附属第一医院
申请日： 2018-10-30 - 公布日： 2019-03-26 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明公开了一种CRISPR单碱基修复系统，包括能表达sgRNA和Cas9的真核表达载体，以及作为供体模板的单链寡核苷酸，其中，所述单链寡核苷酸的碱基序列与以需要修复的单碱基两侧第30～60个碱基之间的碱基序列基本一致，区别在于，在所述供体模板上，与需要修复的单碱基相应的碱基为未突变野生型的碱基，以及需要修复的单碱基的一侧发生了无义突变。本发明还公开了CRISPR单碱基修复系统在制备治疗β珠蛋白基因CD17A→T点突变导致的β地中海贫血病的药物中的应用。本发明中将CRISPR/Cas表达质粒和donor二者共同转染到细胞中，在293TT细胞中特异性的诱导β17地中海贫血中基因突变位点的无痕定向改造，对开展基于单基因点突变疾病的基因编辑精准治疗，具有重要的临床应用价值
单碱基修复系统碱基单链寡核苷酸地中海贫血碱基序列点突变修复供体突变基因突变位点真核表达载体细胞表达质粒定向改造临床应用单基因野生型基因无痕转染制备治疗应用诱导疾病

[发明专利]一种检测碱基突变和甲基化分析的TJ-ARMS方法-CN202310419068.2在审
发明人：刘家兴;祝海宝;李嘉奇;黄智豪;籍雁竹;黄郁媚;王涛;邓荣浩;魏炽炬 -专利权人：汕头大学
申请日： 2023-04-18 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12Q1/6848 文献下载
摘要：本发明公开一种检测碱基突变和甲基化分析的TJ‑ARMS方法，以模板片段结合区的3′末端第1个碱基为扩增决定位点，在进行引物的设计时，在所述引物的3′末端碱基处引入所需突变碱基，在所述引物的3′末端的第2个或第3个碱基处引入第一错配碱基，在所述引物的3′末端的第8～12个碱基处引入第二错配碱基。本发明拟解决单碱基突变检测的低灵敏度和特异性的问题。该技术不仅可以用于qPCR检测平台，同时还可以用于数字PCR平台。根据单碱基突变序列或甲基化位点设计特殊的ARMS引物和探针序列，建立新型TJ‑ARMS方法，从而以极高的灵敏度和特异性检测单碱基突变，亦可用于插入突变、缺失突变(indels)和甲基化分析。
一种检测碱基突变甲基化分析 tj arms 方法

[发明专利]一种核酸单碱基突变检测的方法-CN201911112259.4在审
发明人：裴昊;杨海红;赖魏;李丽 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2019-11-14 - 公布日： 2020-02-11 - 主分类号： C12Q1/6827 文献下载
摘要：本发明公开了一种核酸单碱基突变的检测方法，通过锁式探针成环，通用引物1延伸，阻断剂和引物2特异性竞争引发超支化滚环扩增突变型核酸，从而达到检测突变的目的。所述方法从动力学角度解决了常规热力学方法检测核酸单碱基突变时的温度敏感性问题，克服了PCR需要变温及昂贵的缺点，同时提高了滚环扩增检测单碱基突变的灵敏度和特异性；将合理的竞争杂交反应与滚环等温扩增技术结合，使得可以灵敏地识别和选择性恒温扩增等位基因频率为0.1％的单碱基突变，可以对完整基因组DNA中包含的低频率单碱基未知突变进行简便、快速和高选择性等温扩增检测。可以用于癌症相关突变的检测，具有潜在的应用价值。
突变检测单碱基突变核酸单碱基滚环扩增等位基因频率等温扩增技术等温扩增检测突变型核酸完整基因组温度敏感性高选择性恒温扩增竞争杂交锁式探针通用引物动力学灵敏度超支化单碱基低频率潜在的热力学阻断剂变温成环滚环引物灵敏癌症延伸应用

[发明专利]一种简单定性/定量检测单碱基基因编辑技术工作效率的报告系统-CN201711447105.1有效
发明人：李大力;张晓辉;刘明耀 -专利权人：华东师范大学;上海邦耀生物科技有限公司
申请日： 2017-12-27 - 公布日： 2021-07-16 - 主分类号： C12N15/52 文献下载
摘要：本发明提供了一种简单定性/定量检测单碱基基因编辑技术工作效率的报告系统，具体地，本发明应用单碱基基因编辑技术(base editor)可在其突变窗口内将带有ACG靶点的单碱基胞嘧啶(C)突变为胸腺嘧啶(T)，并可快速、简便、准确的评估sgRNA的活性和突变效率。
一种简单定性定量检测碱基基因编辑技术工作效率报告系统

[发明专利]一种新冠病毒基因单碱基突变检测方法及其应用-CN202111445263.X在审
发明人：余路新;陈章权;汤子彬;邓玉玲;何素辉;孙元中;郑国柱;王厚淇 -专利权人：广东医科大学
申请日： 2021-11-30 - 公布日： 2022-03-08 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种新冠病毒基因单碱基突变检测方法及其应用，该新冠病毒基因单碱基突变检测方法基于聚乙二醇辅助，通过发夹探针PS‑HP1和HP2实现SARS‑CoV‑2单碱基突变情况的检测。该方法操作简便，检测耗时短，可对SARS‑CoV‑2单碱基突变基因样本直接检测，且反应无需严格的热循环过程，特异性好，不易受其它核酸影响，灵敏度高，其检测限可达4fM，在10nM‑10fM间线性良好。
一种病毒基因碱基突变检测方法及其应用

[发明专利]一种检测单碱基突变的方法及应用-CN201610015991.X有效
发明人：崔海瑞;吴穹宇;袁兵;宋悦;朱斌 -专利权人：浙江大学
申请日： 2016-01-11 - 公布日： 2019-01-25 - 主分类号： C12Q1/6827 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测单碱基突变的方法及应用，包括针对待测样本与参照的目标区段设计引物，PCR分别扩增；将扩增产物等量混合，高温变性再退火获得异质双链DNA，再经CEL I酶切，酶切产物电泳检测确定单碱基突变样本本发明公开的检测单碱基突变的方法，既可以检测已知的单碱基突变，也可以筛查未知的单碱基突变，既可以确定突变的位置，又可以确定突变的类型，灵敏度高、重复性好又经济。
单碱基突变电泳检测种检测突变退火扩增目标片段正反向引物待测样本等量混合高温变性接头连接接头序列扩增产物连接产物两对引物酶切产物目标区段设计引物异质双链粘性末端灵敏度检测扩增酶切筛查引物切开应用样本回收

[发明专利]一种检测单碱基突变的方法-CN201711045243.7有效
发明人：苏昕;郝丹丹;喻长远;蔡爽;张怡 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2017-10-31 - 公布日： 2021-04-06 - 主分类号： C12Q1/6827 文献下载
摘要：本发明涉及基因突变检测领域的一种检测单碱基突变的方法。该方法其包括以下步骤：S1，根据目标基因设计荧光信号探针；所述荧光信号探针与目标基因的突变型基因完全互补，与目标基因的野生型基因形成单碱基错配；S2，在含荧光信号探针的溶液中加入目标基因的待测样本和λ核酸外切酶，形成反应体系；S3，获取反应体系在反应过程中的实时荧光曲线，判断目标基因的待测样本中是否存在单碱基突变。本发明所述方法可以快速准确地对单碱基突变基因序列进行检测，且对单碱基突变基因序列具有高度的选择性，可用于低丰度突变检测。
一种检测碱基突变方法

[发明专利]一种抗体进化方法及其应用-CN201811110388.5有效
发明人：孟飞龙;刘浏;黄敏;刘婷婷;蔡燕妮 -专利权人：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心
申请日： 2018-09-21 - 公布日： 2023-02-07 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明提供一种抗体进化方法，所述抗体进化方法包含以下步骤：1）提供单碱基基因编辑系统，所述单碱基基因编辑系统可形成单碱基基因编辑复合体，所述单碱基基因编辑复合体包括dCas9酶、sgRNA、MS2胞嘧啶脱氨酶融合蛋白，所述sgRNA靶向待进化抗体的可变区基因；2）利用1）中所述的单碱基基因编辑系统对待进化抗体的可变区基因进行碱基突变，表达突变抗体，获得突变抗体库；3）筛选并富集高亲和力抗体。本发明通过对细胞进行基因编辑，真正实现了抗体基因的定范围自主突变。并通过结合后续的流式分选技术，从而定向选择抗体的进化，提高抗体进化效率。
一种抗体进化方法及其应用

[发明专利]用于检测基因突变的方法-CN201780025043.7在审
发明人：海老沼宏幸;内田桂;塚本百合子 -专利权人：积水医疗株式会社
申请日： 2017-03-29 - 公布日： 2018-12-21 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明的一个目的是提供一种用于设计引物的新方法，该引物确保了在基于ASP‑PCR方法检测单碱基置换的方法中的反应性和鉴别力，并且提供一种用于容易地检测重叠扩增子内的多个点突变(特别是两个相邻单碱基置换)通过使用其中始自3’末端的第三个核苷酸的碱基对应于核酸样品中含有的单碱基置换的突变核苷酸的碱基、其中始自3’末端的第二个核苷酸的碱基不与所述核酸的相应核苷酸的碱基互补、并且其中其他核苷酸的碱基与所述核酸的相应核苷酸的碱基互补的突变引物，可以容易地检测单碱基置换。
核苷酸单碱基碱基置换检测碱基互补核酸突变核苷酸核酸样品基因突变设计引物突变引物点突变反应性扩增子引物

[发明专利]一种基于SaKKHn-pBE系统制备单突变体的方法-CN201911202341.6在审
发明人：杨进孝;张成伟;徐雯;吕欣欣;刘子争 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2019-11-29 - 公布日： 2020-06-19 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于SaKKHn‑pBE系统制备单突变体的方法。所述单突变体的制备方法，包括如下步骤：将SaKKHn‑pBE碱基编辑系统导入生物体或生物细胞内，通过所述SaKKHn‑pBE碱基编辑系统实现基因组靶点序列的编辑，获得所述单突变体；所述单突变体为所述靶点序列中单个位点C突变为T的生物突变体；所述SaKKHn‑pBE碱基编辑系统包括SaKKHn蛋白质、tRNA‑sgRNA和PmCDA1蛋白质。通过本发明的方法对23个水稻基因组靶点序列进行测试，结果发现几乎所有靶点均能够获得突变效率最高的单位点C的单突变体，且其单突变体所占比例大多超过50％。
一种基于 sakkhn pbe 系统制备突变体方法

[发明专利]一种单管嵌套式等位专一聚合酶链式反应方法-CN200410016281.6无效
发明人：徐定邦;朱德芬;谢文凯;徐文慧 -专利权人：徐定邦;徐文慧
申请日： 2004-02-13 - 公布日： 2005-08-17 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明提供一种用超短引物或含若干错配碱基引物检测碱基突变的单管嵌套式聚合酶链式反应方法，即利用长度为6－14碱基的超短引物或含若干错配碱基通常长度引物进行等位专一扩增，使“野生型等位专一引物”完全失去与突变型模板结合的能力，使“突变型等位专一引物”完全失去与野生型模板结合的能力，从而克服检测的假阳性，改善检测的可靠性。适用于分子生物学实验室对单碱基突变的核酸检测和医学临床检测，特别是遗传性疾病、变异病毒感染、耐药性细菌感染和单碱基突变引起的代谢病的核酸分析。
一种嵌套等位专一聚合链式反应方法

[发明专利]一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法-CN201510271333.2在审
发明人：郑斌;程盛;朱金苗;姚东宝;梁好均;朱文娟 -专利权人：合肥师范学院
申请日： 2015-05-22 - 公布日： 2015-10-07 - 主分类号： G01N21/31 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，利用DNA修饰过的纳米金对氧化石墨烯的吸附具有差异来检测单碱基突变，将双链DNA接枝到纳米金粒子表面，利用具有修饰的纳米金在氧化石墨烯上吸附动力学的差别，实现用紫外分光光度计实时研究单碱基突变的状况，本发明为一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，实现了对突变点位置的检测，不需要复杂仪器，仅用紫外分光光度计即可实现定位，用比色法可实现定性分析。
一种基于氧化石墨纳米碱基突变检测方法

[发明专利]肿瘤驱动基因突变和微卫星不稳定性联合检测的方法、试剂盒和引物-CN201910256744.2有效
发明人：蔡微菁;严令华 -专利权人：常州桐树生物科技有限公司
申请日： 2019-04-01 - 公布日： 2022-08-05 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明公开了一种肿瘤驱动基因突变和微卫星不稳定性联合检测的方法、试剂盒和引物，该方法包含：步骤1，设计扩增引物，对目的片段进行PCR扩增，获得含有单碱基突变检测位点的第一PCR产物及含有MSI检测位点的第二PCR产物；步骤2，对PCR产物进行纯化；步骤3，设计用于单碱基延伸反应的第一引物和第二引物；第一引物针对单碱基突变位点进行设计；第二引物3’端的若干个连续碱基与所述第二PCR产物3’端的碱基互补，并且对第二引物的3’端进行修饰，以阻止第二引物的延伸；步骤4，对第一引物及所述第二PCR产物进行单碱基延伸；步骤5，对单碱基延伸反应产物进行纯化；步骤6，对纯化后的单碱基延伸反应产物进行联合检测。
肿瘤驱动基因突变卫星不稳定性联合检测方法试剂盒引物

[发明专利]芯片表面toehold协助下增强的单碱基突变检测-CN201410313153.1在审
发明人：梁好均;徐华国;黄福建 -专利权人：中国科学技术大学
申请日： 2014-07-02 - 公布日： 2014-11-26 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供一种基于toehold协助下的芯片表面增强DNA链替换反应来检测单碱基突变的技术。该技术将双链DNA(toehold交换探针)接枝到芯片表面，利用双偏振干涉测量技术(DPI)，根据toehold协助下的DNA链替换反应原理，实现在DPI上实时定量研究单碱基突变进程。该技术大幅度提高了正确目标链DNA的替换效率同时又能很好的抑制有突变目标链DNA的替换效率，大大提高了单碱基突变检测的信号。
芯片表面 toehold 协助增强碱基突变检测

[发明专利]一种碱基编辑器及其构建方法与应用-CN202111622218.7在审
发明人：程田林;张淑倩;邱佳怡;陈金龙 -专利权人：复旦大学
申请日： 2021-12-28 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及基因编辑技术领域，涉及一种碱基编辑器及其构建方法与应用。本发明通过将胞苷脱氨酶及其突变体融合于Cas12f1为代表的突变型核酸酶的不同位点，得到的新融合蛋白能对位于前间隔序列不同位置的胞嘧啶实现有效的C‑T碱基突变，通过将脱氧腺苷脱氨酶及变体融合于Cas12f1为代表的突变型核酸酶的不同位点，得到的新融合蛋白能对位于前间隔序列不同位置的腺嘌呤和/或胞嘧啶实现有效的A‑G和/或C‑T碱基突变。通过本发明的方法获得的不同的插入位点为基础的融合蛋白，其可突变范围各有差异。本发明的碱基编辑器体积更小，且活性窗口多样化，可实现更广范围、更精细且安全性更高的C‑T单碱基替换和A‑G单碱基替换，能有效拓宽单碱基编辑工具的应用。
一种碱基编辑器及其构建方法应用

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