本申请涉及基因检测的技术领域,具体公开了一种单碱基延伸引物组及维生素A代谢相关基因多态性的检测方法。单碱基延伸引物组至少包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑15所示引物的一条;其检测方法包括以下步骤:分别设计多重PCR扩增引物组和单碱基延伸引物组后,以多重PCR扩增引物组为引物进行PCR扩增后,进行酶消化反应;随后加入单碱基延伸引物组进行单碱基延伸反应;最后将单碱基延伸产物纯化后进行质谱检测,获得待测标本的维生素A相关基因的多态性。
本发明公开了一种基于磁分离和固相单碱基循环延伸技术(SingleBase Circular Extension,SBCE)的单碱基差异(Single Base Difference,SBD)检测新方法。其特征在于以磁性颗粒为载体固定待检测位点的延伸引物,在Taq酶作用下将特定荧光标记的ddNTP将延伸在引物3’端,通过包含有变性、退火和延伸的热循环反应,将模板的基因型信号放大。
本发明涉及基因检测技术领域,具体讲,涉及一种维生素K代谢相关基因的分型试剂盒、引物和分型方法。分型试剂盒至少包括核酸扩增试剂和单碱基延伸反应试剂;核酸扩增试剂中含有如SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:22所示的PCR扩增引物;单碱基延伸反应试剂中含有如SEQ ID NO:23~SEQID NO:43所示的单碱基延伸引物。分型方法包括:PCR扩增引物进行PCR扩增反应、碱性磷酸酶消化、单碱基延伸引物进行单碱基延伸反应、脱盐处理、高效液相色谱‑质谱联用检测。
本发明提供了一种基于核酸质谱技术可以同时检测27种呼吸道病原体的引物组、试剂盒和应用,属于病原体核酸检测领域。本发明试剂盒针对临床常见的27种呼吸道病原体设计了PCR扩增引物和单碱基延伸引物。病原菌对应引物和单碱基延伸引物序列见SEQ ID NO:1‑81。本发明的核酸质谱法整合了多重RT‑PCR技术和单碱基延伸技术,通过多重RT‑PCR对病原体目标基因进行扩增,提高检出的灵敏性;单碱基延伸反应通过对延伸引物进行一个碱基扩增,然后通过区分延伸产物分子质量进行病原体识别同时,核酸质谱的通量高,一个反应孔最高可实现40重基因的扩增,借助于芯片技术,单次最高可对384个样本进行分析;具有自动化程度高、检测通量高、灵敏度高、特异性好的优点。
本发明涉及基因检测技术领域,具体讲,涉及一种维生素B12代谢相关基因的分型试剂盒、引物和分型方法。分型试剂盒至少包括核酸扩增试剂和单碱基延伸反应试剂;核酸扩增试剂中含有如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.60所示的PCR扩增引物;单碱基延伸反应试剂中含有如SEQ ID NO.61~SEQ ID NO.101所示的单碱基延伸引物。分型方法包括:PCR扩增引物进行PCR扩增反应、碱性磷酸酶消化、单碱基延伸引物进行单碱基延伸反应、脱盐处理、高效液相色谱‑质谱联用检测。