本发明涉及半乳糖激酶在合成N-乙酰半乳糖-1-磷酸及其衍生物的应用,属于生物技术技术领域。包括:(1)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的半乳糖激酶配制成半乳糖激酶溶液;(2)将与N-乙酰半乳糖或N-乙酰半乳糖衍生物配制成N-乙酰半乳糖溶液或N-乙酰半乳糖衍生物溶液;(3)将半乳糖激酶溶液与N-乙酰半乳糖溶液或N-乙酰半乳糖衍生物溶液按比例混合,并加入MgCl2和ATP;反应后,经纯化步骤,获得N-乙酰半乳糖-1-磷酸或N-乙酰半乳糖-1-磷酸衍生物。本发明克服了现有研究中由于半乳糖激酶不能合成N-乙酰半乳糖-1-磷酸或者合成葡萄糖-1-磷酸的效率非常低,无法应用于实际生产中的技术偏见。