本发明公开了一种人类副流感病毒的MNP标记位点、引物组合物、试剂盒及其应用,所述MNP标记位点是指在人类副流感病毒基因组上筛选的区分于其他物种且在物种内部具有多个核苷酸多态性的基因组区域,包括MNP‑1~MNP‑15的标记位点;所述引物如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.30所示。所述MNP标记位点能特异的鉴定人类副流感病毒并监测变异;所述引物互不干扰,综合多重扩增和测序技术,可一次性对多样本的所有标记位点进行序列分析,具有高通量、多靶点、高灵敏、高精准和免培养的检测优势,可应用于大规模样本的人类副流感病毒的鉴定和遗传变异检测,对人类副流感病毒的科研和防疫监测均具有重要意义。