[发明专利]用置换色谱纯化血红蛋白产物的方法

摘要

通过两步置换色谱法从血红蛋白粗溶液中纯化血红蛋白以得到含至少９９％预选血红蛋白的水溶液。步骤之一是在阴离子交换条件下完成的，而另一个则在阳离子交换条件下。在两步骤中，均使所述交换柱超载以便用与柱亲合性更强的杂质，并用不纯的血红蛋白溶液作为置换剂置换血红蛋白。通常首先完成阴离子交换，用比血红蛋白酸性更强的杂质从柱上置换所述血红蛋白，而其自身仍吸附在柱上，以达分离目的，然后完成阳离子交换过程，在该步骤中用来自第一步骤的洗脱液，在超载条件下，用碱性更强的杂质从柱上置换血红蛋白以得到基本上纯的血红蛋白溶液。

主权项

1.一种从含有污染蛋白质类物质的粗血红蛋白溶液中分离预选的血红蛋白的方法，所述方法包括：在第一个色谱步骤中，向色谱柱提供粗溶液原料，并使其在比所述预选血红蛋白酸性更强的粗溶液组分有选择性结合亲合性的pH范围为7-10、原料溶液电导率小于3ms的阴离子交换条件下，或在比所述预选血红蛋白碱性更强的粗溶液组分，有选择性结合亲合性的pH范围为5-9、原料溶液电导率小于3ms的阳离子交换条件下进行色谱；在第一色谱步骤中，继续供粗溶液直到基本上完全由血红蛋白和亲合性更大的成分负载了该柱，以便使柱超载并随后从其上置换血红蛋白；在第二色谱步骤中，向色谱柱提供来自第一步骤含血红蛋白的洗脱液，并使其在不是所述第一步骤所选的阴离子交换条件或阳离子交换条件下进行色谱；在第二色谱步骤中继续提供所述洗脱液直到在所述第二步骤条件下，基本上完全由血红蛋白和亲合性更大的组分负载该柱，以便使柱超载，并随后从其上置换血红蛋白。