[发明专利]Grx-roGFP/Gpx3-roGFP基因过表达MDCK单克隆细胞系构建方法在审
| 申请号： | 202111654095.5 | 申请日： | 2021-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN114277059A | 公开（公告）日： | 2022-04-05 |
| 发明（设计）人： | 王娜;李筱楠;吴秀稳 | 申请（专利权）人： | 河北医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;C12N15/62;C12R1/91 |
| 代理公司： | 重庆知育道知识产权代理事务所(普通合伙) 50296 | 代理人： | 杨志杰 |
| 地址： | 050499 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明公开了Grx‑roGFP/Gpx3‑roGFP基因过表达MDCK单克隆细胞系构建方法，其构建方法步骤如下：步骤一：首先将目的基因Grx‑roGFP和Gpx‑roGFP克隆至慢病毒载体pLV‑puro上；步骤二：进一步用慢病毒载体pLV‑W包装成慢病毒后感染MDCK细胞，通过puromycin筛选W基因过表达稳定细胞株，从而，构建了可实时动态观察肾细胞线粒体内氧化还原动态的细胞系，本发明为研究肾脏内毒物，药物，代谢物引起的活性氧病变提供了原位模型；本发明选取准确反应线粒体内氧化还原动态的GSH及H2O2，将可特异性检测GSH的谷氧还蛋白(Glutaredoxin，Grx)与特异性检测H2O2的谷胱甘肽过氧化酶Gpx3和roGFP融合。通过观测Grx‑roGFP及GPX3‑roGFP可实时动态检测细胞内谷胱甘肽和H2O2，从而推测细胞体内氧化还原状态的变化，揭示活性氧的致病机理。 | ||
| 搜索关键词： | grx rogfp gpx3 基因 表达 mdck 单克隆 细胞系 构建 方法 | ||
【主权项】：
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