[发明专利]一种鸭卵巢颗粒细胞的体外分离纯化培养方法在审

专利信息
申请号: 202111489816.1 申请日: 2021-12-08
公开(公告)号: CN113999809A 公开(公告)日: 2022-02-01
发明(设计)人: 张蕾;朱睿;章敬旗;张响英 申请(专利权)人: 江苏农牧科技职业学院
主分类号: C12N5/071 分类号: C12N5/071
代理公司: 南京禾祁专利代理事务所(普通合伙) 32462 代理人: 孟捷
地址: 225300*** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明公开了一种鸭卵巢颗粒细胞的体外分离纯化培养方法,包括以下步骤:1)取出直径12‑15mm的排卵前卵泡F1‑F6;2)剥除外层血管膜;3)剪开,夹取剩余膜层放入PBS培养皿中震荡、漂洗出白色颗粒细胞层;4)剪碎加入胰蛋白酶消化;5)采用FSHR和LHR抗体将细胞双重特异性标记,流式细胞分选;6)用多聚赖氨酸溶液处理培养皿底部,将细胞悬液进行恒温培养;7)培养24h倒置显微镜下观察细胞形态,HE染色、间接免疫荧光鉴定颗粒细胞特异性。本发明提供的培养方法高效、系统,免去反复冲洗去除卵黄细胞及血细胞,得到的鸭卵巢颗粒细胞纯度高,活力好,鸭卵巢颗粒细胞24h贴壁率及成增殖效率高达80%以上。
搜索关键词: 一种 卵巢 颗粒 细胞 体外 分离 纯化 培养 方法
【主权项】:
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