[发明专利]一种采用绿藻PMI作为番茄遗传转化筛选标记基因的方法有效
| 申请号： | 201911015798.6 | 申请日： | 2019-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN110699370B | 公开（公告）日： | 2022-12-02 |
| 发明（设计）人： | 林渊源;黄俊潮 | 申请（专利权）人： | 中国科学院昆明植物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/61 | 分类号： | C12N15/61;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 昆明祥和知识产权代理有限公司 53114 | 代理人： | 马晓青 |
| 地址： | 650201 *** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明提供一种采用绿藻PMI作为番茄遗传转化筛选标记基因的方法。该方法包括绿藻PMI的克隆，植物双元表达载体的构建，番茄的转化及转基因番茄的鉴定等步骤。该基因能替代目前广泛使用的抗生素基因、抗除草剂基因及大肠杆菌来源PMI等异源基因作为标记基因应用于番茄的遗传转化，获得更具食品安全性、生物安全性和生态安全性的转基因番茄。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 采用 绿藻 pmi 作为 番茄 遗传 转化 筛选 标记 基因 方法 | ||
【主权项】：
1.一种采用绿藻PMI作为番茄遗传转化筛选标记基因的方法，其特征在于标记基因为绿藻起源，筛选剂为安全无毒的甘露糖，该方法包括以下步骤：/n(1)PMI的克隆/n通过PCR技术克隆来自于Chlorococcum sp.的PMI磷酸甘露糖异构酶基因，获得安全标记基因，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；/n(2)表达载体的构建/n将标记基因酶切后连接引入双元载体PBI121以代替其原有的卡那抗性基因NPTⅡ，新载体无NPTⅡ标记而带有安全筛选标记PMI,命名为PMI-pBI121，采用电击转化法导入农杆菌LBA4404；/n(3)番茄的遗传转化/n采用农杆菌介导的叶盘法转化番茄，培养2天后，转入含不同浓度的甘露糖的筛选培养基筛选培养，出芽后转入生根培养基生根得到转基因植株；/n(4)转基因番茄的鉴定/nPCR鉴定是否为转基因植株；氯酚红实验验证是否为转基因植株。/n
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