[发明专利]一种农杆菌介导水稻遗传转化方法在审
| 申请号： | 201910906344.1 | 申请日： | 2019-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN110607323A | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 顾勇 | 申请（专利权）人： | 四川育良生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 51250 成都时誉知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 沈成金 |
| 地址： | 610000 四川省成都市温江区成都海*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种农杆菌介导水稻遗传转化方法，包括如下步骤：制备MS培养基，选取水稻种子，除菌后将种子均匀播种到MS培养基上；进行22‑24℃的无光照培养，培养时间8‑10天至种子发芽，然后剪取新鲜的子叶备用；活化农杆菌；侵染；转入共培养基进行共培养，同时在光照下培养2‑3d；将共培养后的愈伤组织收入培养瓶中，加入羧苄水进行清洗，同时不断摇晃培养瓶，清洗不再浑浊后倒去羧苄水，将愈伤通过无菌滤纸干燥；进行筛选培养；进行分化培养，直至愈伤组织出现绿芽。通过用无光照培养来替代现有技术愈伤组织的诱导培养、继代培养，免去预培养过程，提高了愈伤组织分化能力，进而增加了出苗率。 | ||
| 搜索关键词： | 愈伤组织 培养瓶 无光照 清洗 水稻遗传转化 农杆菌介导 分化能力 分化培养 共培养基 继代培养 筛选培养 水稻种子 无菌滤纸 诱导培养 出苗率 农杆菌 预培养 除菌 活化 剪取 侵染 愈伤 子叶 浑浊 摇晃 制备 备用 光照 发芽 播种 转入 替代 新鲜 收入 | ||
【主权项】：
1.一种农杆菌介导水稻遗传转化方法，其特征在于：/n包括如下步骤：/nS1.制备MS培养基，在选用基础培养基后，加入蔗糖、甘露醇、琼脂、1％的马尿酸钠溶液，将培养基的pH调整至6，灭菌后制备出MS培养基，备用；/nS2.选取水稻种子，去颖壳；/nS3.将去颖壳后的种子放入超净工作台上，用酒精浸泡1min后，再用次氯酸钠对种子进行消毒，之后用灭菌水将种子清洗10次，并将其置于无菌滤纸上吹干，最后将种子均匀播种到S1中的MS培养基上；/nS4.将S3中的MS培养基进行22-24℃的无光照培养，培养时间8-10天至种子发芽，然后剪取新鲜的子叶备用；/nS5.活化农杆菌；/nS6.侵染，将S5中活化后的农杆菌的单菌落接种到天然液体培养基中，振荡培养24h，至对数生长期时将S4中培养好的子叶浸泡到天然液体培养基中进行侵染；/nS7.去除农杆菌液后，将侵染好后的组织放在无菌滤纸上吸去过多的菌液，然后转入共培养基进行共培养，同时在光照下培养2-3d；/nS8.将共培养后的愈伤组织收入培养瓶中，加入羧苄水进行清洗，同时不断摇晃培养瓶，清洗不再浑浊后倒去羧苄水，将愈伤通过无菌滤纸干燥；/nS9.将S8中干燥后的愈伤组织接种在筛选培养基上进行筛选培养；/nS10.将筛选培养出的抗性愈伤转入分化培养基进行分化培养，直至愈伤组织出现绿芽。/n
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