[发明专利]博来霉素诱变紫花苜蓿创制耐盐种质的方法

摘要

本发明公开了博来霉素诱变紫花苜蓿创制耐盐种质的方法，特别涉及博来霉素作为诱变剂进行紫花苜蓿耐盐种质创制的方法。此方法包括以下步骤：利用博来霉素作为诱变剂筛选材料的半致死剂量；对材料的盐致死浓度进行筛选；在半致死剂量下利用博来霉素诱变材料；在含有致死盐浓度的培养基中接种诱变材料；初步获得耐盐突变体。该技术方法具有易于操作、安全、无辐射以及诱变效果好的优点。

主权项

1.博来霉素诱变紫花苜蓿创制耐盐种质的方法，其特征在于，具体步骤如下：/n步骤1：利用博来霉素作为诱变剂筛选材料的半致死剂量；/n方法一：博来霉素溶液浸泡苜蓿种子/n配置不同浓度的博来霉素溶液，用浓度为0mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L的博来霉素溶液对挑选好的中苜三号苜蓿种子进行2h浸泡诱变；用浓度为0mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、90mg/L、100mg/L的博来霉素溶液对三得利苜蓿种子进行2h浸泡诱变；将经过诱变的种子和没有经过诱变处理的正常种子(作为对照)分别接种在MS培养基上；培养箱中培养，培养条件：25℃培养，3000lux，12D/12N；一周后统计诱变种子和正常种子的发芽情况并计算出二者的发芽率，筛选出博来霉素的半致死剂量；/n方法二：博来霉素加入MS培养基/n配置终浓度为0mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L、10mg/L博来霉素的MS培养基，将灭菌后的中苜三号苜蓿种子接种在这些培养基上；配置终浓度含0mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L、10mg/L、14mg/L、16mg/L、20mg/L、26mg/L博来霉素的MS培养基，将灭菌好的三得利苜蓿种子接种在这些含博来霉素的MS培养基上，一周后统计含有博来霉素的MS培养基上种子的发芽率和对照组的发芽率，筛选出博来霉素的半致死剂量；/n步骤2：对材料的致死盐浓度进行筛选；/n将经过灭菌处理的中苜三号、三得利苜蓿种子分别接种到含有一定盐浓度梯度的MS中，并设置未加盐的一组作为对照；培养箱中培养，培养条件：25℃培养，3000lux，12D/12N；一周后统计不同盐浓度梯度培养瓶中中苜三号和三得利苜蓿种子的发芽率，根据发芽率筛选出不同品种发芽期间的致死盐浓度；/n步骤3：在半致死剂量下利用博来霉素诱变材料；/n用前边筛选出来的两种方法的博来霉素半致死剂量分别诱变三得利、中苜三号苜蓿种子；/n步骤4：在含有致死盐浓度的培养基中接种诱变材料；/n将用博来霉素诱变处理的三得利和中苜三号紫花苜蓿种子分别无菌接种到2个品种的含致死盐浓度的MS培养基上，培养箱中培养，培养条件：25℃培养，3000lux，12D/12N；/n步骤5：初步获得耐盐突变体；/n培养14天，发芽的植株为初步获得的候选耐盐突变体。/n