[发明专利]基于排阻色谱和超滤技术的胞外囊泡分离和富集方法有效
| 申请号： | 201910639939.5 | 申请日： | 2019-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN110511902B | 公开（公告）日： | 2020-10-02 |
| 发明（设计）人： | 周卫;赵立波;孔关义;王德键;王耀杰;闵力 | 申请（专利权）人： | 北京恩泽康泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/078;C09K11/06 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 黄爽 |
| 地址： | 100096 北京市昌平区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种基于排阻色谱和超滤技术的胞外囊泡分离和富集方法，包括：将荧光染料与体液混合，加样至排阻色谱柱，根据荧光强度收集馏分并合并，合并的馏分依次用蛋白酶K和RNaseA处理，最后超滤浓缩。本发明将排阻色谱法与超滤法相结合解决了排阻色谱法产物浓度偏低的问题，同时引入荧光染料作为示踪外参，不仅能够准确定位EVs所处的馏分，在进入下一步操作前还能排除因滤膜破损导致的EVs损失。本发明还提供能从体液中分离富集高纯度细胞外囊泡的试剂盒。本方法无需超速离心，即可从体液中分离获得高纯度的EVs，同时配合蛋白酶K和RNaseA处理，能有效消除体液中非囊泡来源的核酸污染，从而大幅提高细胞外囊泡的核酸纯度。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 色谱 超滤 技术 胞外囊泡 分离 富集 方法 | ||
【主权项】：
1.基于排阻色谱和超滤技术的胞外囊泡分离和富集方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)将粒径30-120nm的荧光染料与体液混合；/n2)将1体积含荧光染料的体液加至平衡好的排阻色谱柱中，然后用流动相洗脱，以0.5体积为一个馏分，依次收集共14个馏分，并检测每个馏分的荧光强度，将荧光强度大于400的第1个馏分及其后2～3个馏分合并；/n3)向合并后的馏分中依次加入蛋白酶K和RNaseA进行处理；/n4)将步骤3)所得处理液加入到截留分子量100KDa的超滤管中浓缩，收集的截留物中含有富集的囊泡。/n
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