[发明专利]搭载抗PD-1单链抗体的基因工程化红细胞及其制备方法

摘要

本发明属于医药生物领域，具体涉及搭载抗PD‑1单链抗体的基因工程化红细胞的制备方法，包括如下步骤：将目的片段序列构建于慢病毒表达载体；将目的序列载体进行慢病毒包装，获得高滴度的慢病浓缩液；从外周血单个核细胞中分离和富集Lin‑CD34‑细胞；诱导所述Lin‑CD34‑细胞向红系分化并进行扩增；使用慢病毒浓缩液对Lin‑CD34‑细胞进行感染；通过红细胞脱核得到成熟的anti‑PD‑1scFv‑红细胞。本发明还提供了搭载抗PD‑1单链抗体的基因工程化红细胞，将抗PD‑1单链抗体靶向递送至肿瘤组织使其更有效的发挥T细胞激活功能，并能明显减少药物用量，缓解全身性的肿瘤免疫药物带来的副作用。

主权项

1.搭载抗PD‑1单链抗体的基因工程化红细胞的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1：将目的片段序列构建于慢病毒表达载体，获得目的序列载体，所述目的片段为Anti‑PD‑1 scFv，所述Anti‑PD‑1 scFv表示抗PD‑1单链可变区片段；S2：将步骤S1中的目的序列载体进行慢病毒包装，经离心浓缩后，获得高滴度的慢病浓缩液；S3：从外周血单个核细胞中分离Lin‑CD34‑细胞和富集Lin‑CD34‑细胞；S4：将所述Lin‑CD34‑细胞培养基更换为分化第一阶段培养基中，诱导所述Lin‑CD34‑细胞向红系分化并进行扩增；S5：使用步骤S2中的慢病毒浓缩液对步骤S4中的Lin‑CD34‑细胞进行感染，获得anti‑PD‑1 scFv‑Lin‑CD34‑细胞；S6：将所述anti‑PD‑1 scFv‑Lin‑CD34‑细胞的培养基更换为分化第二阶段培养基，所述anti‑PD‑1 scFv‑Lin‑CD34‑细胞通过红细胞脱核得到成熟的anti‑PD‑1 scFv‑红细胞，即为搭载抗PD‑1单链抗体的基因工程化红细胞。