[发明专利]一种阿片类活性物质的通用检测方法及其检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种阿片类活性物质的通用检测方法及其检测试剂盒，检测试剂盒分为检测组试剂和对照组试剂两种成分，检测组试剂包括稳定表达人源μ型阿片受体MOR1基因的单克隆细胞系MOR1•copGFP/293和细胞内游离钙离子检测荧光探针试剂Fura Red，对照组试剂包括空白对照单克隆细胞系copGFP/293和细胞内游离钙离子检测荧光探针试剂Fura Red；空白对照单克隆细胞系copGFP/293的制备方法为：将pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑copGFP质粒、pH1质粒、pH2质粒共转染至慢病毒包装细胞293V，制备得到EF1‑copGFP慢病毒；将EF1‑copGFP慢病毒感染人胚肾细胞293，得到所述空白对照单克隆细胞系copGFP/293。本发明可实现所有阿片类活性物质的精确、高灵敏的快速检测，可解决新型合成阿片类精神活性物质监管难的问题。

主权项

1.一种阿片类活性物质的通用检测方法，其特征在于包括以下步骤：1）将阿片受体基因MOR1克隆到一个含有EF1启动表达荧光蛋白的载体的CMV启动子下，构建表达质粒；2）将步骤1）构建的带荧光蛋白基因的质粒转染到真核永生化细胞，并建立EF1‑荧光蛋白基因稳转细胞系，进行培养扩增得到检测组培养液；同样建立转染空白对照质粒，建立空白对照EF1‑荧光蛋白基因稳转细胞系，进行培养扩增得到对照组培养液；3）步骤2）检测组培养液中加入标准品，标准品为吗啡或芬太尼，配制一系列不同标准品浓度的检测组标准液；检测组标准液中分别加入细胞内游离钙离子探针试剂，充分反应后，进行检测胞内荧光蛋白的荧光值PF和荧光钙离子的荧光值Ca²⁺F，以测得的荧光值Ca²⁺F/荧光值PF比值作为纵坐标，以标准品的浓度为横坐标绘制标准曲线，计算拟合回归方程；4）步骤2）检测组培养液和对照组培养液中分别加入待测样本，分别配制得到样本液和对照液，样本液中的待测样本浓度与对照液中的待测样本浓度相同；样本液和对照液中分别加入细胞内游离钙离子探针试剂，充分反应后，对反应后的样本液进行检测胞内荧光蛋白的荧光值PF₁和荧光钙离子的荧光值Ca²⁺F₁，对反应后的对照液进行检测胞内荧光蛋白的荧光值PF₂和荧光钙离子的荧光值Ca²⁺F₂，计算得到荧光值Ca²⁺F₁/荧光值PF₁比值与荧光值Ca²⁺F₂/荧光值PF₂比值之差，并代入步骤3）回归方程，即可计算出检测样本中的阿片类活性物质含量。