[发明专利]超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法同时筛查鱼中多类别药物残留的方法

摘要

本发明超高效液相色谱‑四极杆飞行时间质谱法同时筛查鱼中多类别药物残留的方法，同时筛查的多类别药物为恩诺沙星、达氟沙星、四环素、土霉素、金霉素、强力霉素、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺多辛、磺胺异噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺醋酰、磺胺二甲基嘧啶、阿奇霉素、替米考星、麦迪霉素、罗红霉素、乙酰螺旋霉素、多拉菌素、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ和罗丹明B，通过优化d‑SPE前处理方法的参数以保证所有目标药物均获得良好的回收率，用优化后的色谱质谱条件对29种目标药物同时进行筛查，可实现鱼中常见多类别药物残留的同时筛查，在鱼类食品领域具有较好的应用前景。

主权项

1.超高效液相色谱‑四极杆飞行时间质谱法同时筛查鱼中多类别药物残留的方法，其特征在于，所述同时筛查的多类别药物为恩诺沙星、达氟沙星、四环素、土霉素、金霉素、强力霉素、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺多辛、磺胺异噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺醋酰、磺胺二甲基嘧啶、阿奇霉素、替米考星、麦迪霉素、罗红霉素、乙酰螺旋霉素、多拉菌素、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ和罗丹明B，包括以下步骤：步骤1，向鱼样品中依次加入甲醇和乙酸酸化的乙腈水溶液得到混合体系A，向混合体系A中加入Na₂EDTA‑Mcllvaine缓冲溶液后混合均匀得到混合体系B，其中鱼样品取样量、甲醇体积、混合体系A体积和Na₂EDTA‑Mcllvaine缓冲溶液体积四个参数的比例为(1.0～5.0g)：(2.0～3.0mL)：12.5mL：2.5mL；所述乙酸酸化的乙腈水溶液中，乙腈与水的体积比为84:16，乙酸体积占乙腈水溶液体积的1％；所述Na₂EDTA‑Mcllvaine缓冲溶液的浓度为0.1mol/L，pH＝4.0±0.1；步骤2，向混合体系B加入3.0～6.0g无水硫酸镁、1.9g乙酸钠和1.5g氯化钠，混合均匀后离心得到上清液A；步骤3，向上清液A中加入0.4g C18、0.4g PSA和0.1～0.5g无水硫酸镁，混合均匀后离心得到上清液B，将上清液B用0.22μm滤膜过滤后得到空白基质样液；步骤4，采用空白基质样液稀释混合标准储备液至150μg/kg～750μg/kg得到混合体系C，采用流动相B稀释混合标准储备液至150μg/kg～750μg/kg得到混合体系D，采用超高效液相色谱‑四极杆飞行时间质谱，对混合体系C和混合体系D进行全扫描分析，与所述同时筛查的多类别药物的标准物质保留时间比对，对所述同时筛查的多类别药物进行定性分析，采用基质匹配标准校正法对所述药物进行定量分析；其中，色谱柱型号为Thermo Hypersil GOLD AQ，规格为100mm×4.6mm，5μm；柱温为35℃；流动相A为水、甲酸和甲酸铵的混合溶液，其中甲酸体积占混合溶液体积的0.2％，甲酸铵的浓度为4.0mmol/L；流动相B为甲醇、甲酸和甲酸铵的混合溶液，其中甲酸体积占混合溶液体积的0.2％，甲酸铵的浓度为4.0mmol/L；梯度洗脱程序为：0.0～1.0min时，流动相A的比例保持100％；1.0～7.0min时，流动相A的比例由100％线性减少至0％；7.0～15.0min时，流动相A的比例保持0％；15.0～17.0min时，流动相A的比例由0％线性增加至100％；17.0～25.0min时，流动相A的比例保持100％；流速为0.3mL/min；进样量为10.0μL；混合标准储备液的浓度为1μg/mL，所述同时筛查的多类别药物标准物质的溶剂为甲醇、100％的流动相A、100％的流动相B、体积份数为80％的流动相B+体积份数为20％的流动相A、体积份数为60％的流动相B+体积份数为40％的流动相A、体积份数为40％的流动相B+体积份数为60％的流动相A、体积份数为20％的流动相B+体积份数为80％的流动相A和乙腈中的任意一种；质谱条件为：采用电喷雾离子源，于ESI⁺模式和ESI^‑模式下检测，采用ESI⁺模式时毛细管电压为4.0kV，采用ESI^‑模式时毛细管电压为3.5kV；ESI⁺模式和ESI^‑模式下的其余共同参数如下：喷嘴电压为1.0kV；干燥气温度为280.0℃；干燥气流量为13.0L/min；雾化气压力为20.0psi；鞘气温度为350.0℃；鞘气流量为12.0L/min，采用氮气作为雾化气、干燥气和鞘气，其中恩诺沙星、达氟沙星、四环素、土霉素、金霉素、强力霉素、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺多辛、磺胺异噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺醋酰、磺胺二甲基嘧啶、阿奇霉素、替米考星、麦迪霉素、罗红霉素、乙酰螺旋霉素、多拉菌素、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ和罗丹明B的电离模式为ESI⁺，氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的电离模式为ESI^‑。